DMEM低糖液体培养基的应用

背景及概述^[1]

DMEM低糖液体培养基可用于细胞培养，保存条件：2-8°C，一年有效。产品成分：含1000mg/LD-葡萄糖，584mg/L L-谷氨酰胺，3700mg/L碳酸氢钠。 pH值7.0-7.4。

应用^[2]

针对ENS功能障碍相关疾病还没有形成有效治疗体系的缺陷，CN201510495593.8提供了一种骨髓基质干细胞在制备治疗肠神经系统功能缺失或障碍的神经修复材料中的应用。它将骨髓基质干细胞(Bonemarrowstromalcells,BMSC)和含有神经胶质细胞源性神经营养因子(glialcellline-derivedneurotrophicfactor，GDNF)的胎肠培养基(fetalgutconditionmedium，FGCM)共同培养预处理， 得到神经修复材料，并将神经修复材料注入患病受体内，从而促进消化道肠神经系统大量神经再生和胃肠动力的恢复。

为实现上述目的，本发明提供的一种骨髓基质干细胞在制备治疗肠神经系统功能缺失或障碍的神经修复材料中的应用。为实现上述应用过程，本发明还提供了一种用于治疗肠神经系统功能缺失或障碍的神经修复材料，它的原料是由骨髓基质干细胞、含有碱性成纤维细胞生长因子的DMEM低糖液体培养基和含有神经胶质细胞源性神经营养因子的胎肠培养基组成，其中，所述DMEM低糖液体培养基的配方为1000mg/L的葡萄糖，15％的胎牛血清，2mmol/L的L-谷氨酰胺， 110mg/L的丙酮酸钠，100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素；

所述胎肠培养基的制备方法，包括以下步骤：

1)取胚胎发育15天的SD孕鼠，45mg/kg的戊巴比妥钠腹腔注射常规麻醉 大鼠；

2)无菌条件下取出8～10条胎肠，用无Ca²⁺，Mg²⁺的PBS清洗2～3次；

3)再用1mg/mL的胶原酶常温消化15min；

4)PBS洗2次，反复吹打研磨，加入含有20μg/mL纤连蛋白的DMEM低 糖液体培养基，并接种于培养瓶中；

5)3天后收集培养液，84g离心5min，取上清过滤，即得到FGCM原培 养基；

6)使用时，将FGCM原培养基与DMEM低糖液体培养基按体积比1∶1混 合，并调整pH值为7.4，即得到胎肠培养基。

上述神经修复材料的制备方法，包括以下步骤：

1)首先将骨髓基质干细胞置于含有碱性成纤维细胞生长因子的DMEM低糖液体培养基中，培养12～36h；得到培养物；培养时间为24h；

2)将步骤1)得到培养物置于含有神经胶质细胞源性神经营养因子的胎肠 培养基中培养10～15d，培养时间为10d，得到神经修复材料；其中，每3 天更换培养基。

本发明的有益效果在于：

1)本发明的神经修复材料用于治疗肠神经系统功能缺失或障碍，该神经修复材料是由骨髓基质干细胞(Bonemarrowstromalcells,BMSC)、含有碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,BFGF)的DMEM低糖液体培养基和含有神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的胎肠培养基(FGCM)共同培养预处理，得到神经修复材料注入患病受体内，从而促进消化道肠神经系统大量神经再生和胃肠动力的恢复。说明经过预处理的BMSC可以用于ENS功能缺失或障碍相关疾病的治疗。

2)本发明神经修复材料中共同培养(预处理)的BMSC可以导致有效神经再生，没有经过培养预处理的BMSC没有发现有效神经再生现象。体内外实验表明BMSC可能通过影响神经胶质细胞源性的神经营养因子正反馈机制促进神经再生。

3)本发明制备神经修复材料的方法提供了一种治疗胃肠道肠神经系统疾病的手段，该方法可以有效地运用于其它神经损伤相关疾病修复的应用中。

主要参考资料

[1] DMEM低糖液体培养基说明书

[2] CN201510495593.8骨髓基质干细胞在制备治疗肠神经系统功能缺失或障碍的神经修复材料中的应用