TteAP热稳定核酸酶的使用注意事项

背景及概述^[1]

核酸酶是一类催化核苷酸和核酸中的磷酸二酯键水解的酶，分内切核酸酶(endonucleases)和外切核酸酶(ex-onucleases)，对紫外线引起的DNA大型光损伤和各种化学物与DNA形成的加合物的切除修复中起作用。在N-糖基化酶切除异常的碱基形成AP位点(见切除修复)后，如插入酶将正确的碱基插入AP位点仍不能达到完全修复时，即由AP内切核酸酶在AP位点或其旁边的5′端将DNA切开一个缺口，使一端成为5′-磷酸基，另一端成为3′-OH基。随之外切核酸酶再切除一些碱基。除AP内切核酸酶外，还有一些对某些DNA损伤有特异性的内切核酸酶。其中较特殊的是切除由紫外线产生的嘧啶二聚体的UV内切核酸酶。它有时还能作用于许多较大的螺旋扭曲变形损伤。由于UV内切核酸酶还具有外切作用，有时称之为“切除核酸酶”(ex-cinuclease)。参见切除修复、聚合和连接酶。

TteAP热稳定核酸酶来源于嗜热温泉tengcongensis，该酶识别缺嘌呤/缺嘧啶位点（Apurinic/apyrimidinic）核苷酸，其内切酶活性将受损DNA损伤位点进行切断，然后在其外切酶（3’-5’）活性下去除受损DNA位点，完成DNA的损伤修复。TteAP热稳定核酸酶酶极其耐热，反应温度为70℃。

使用注意事项^[1]

（1）1×TteAPBuffer：20mMTris，10mMMgCl2，1mMDTT（pH7.9@25℃）。

（2）该酶的反应温度为70°C，90°C5min失活。

（3）该酶与PCR反应条件兼容。

主要参考资料

[1] 卫生学大辞典