网站主页 > TTE AP热稳定核酸酶 > 新闻专题 > TteAP热稳定核酸酶的使用注意事项

TteAP热稳定核酸酶的使用注意事项

发布日期:2019/4/17 17:17:09

背景及概述[1]

核酸酶是一类催化核苷酸和核酸中的磷酸二酯键水解的酶,分内切核酸酶(endonucleases)和外切核酸酶(ex-onucleases),对紫外线引起的DNA大型光损伤和各种化学物与DNA形成的加合物的切除修复中起作用。在N-糖基化酶切除异常的碱基形成AP位点(见切除修复)后,如插入酶将正确的碱基插入AP位点仍不能达到完全修复时,即由AP内切核酸酶在AP位点或其旁边的5′端将DNA切开一个缺口,使一端成为5′-磷酸基,另一端成为3′-OH基。随之外切核酸酶再切除一些碱基。除AP内切核酸酶外,还有一些对某些DNA损伤有特异性的内切核酸酶。其中较特殊的是切除由紫外线产生的嘧啶二聚体的UV内切核酸酶。它有时还能作用于许多较大的螺旋扭曲变形损伤。由于UV内切核酸酶还具有外切作用,有时称之为“切除核酸酶”(ex-cinuclease)。参见切除修复、聚合和连接酶。

TteAP热稳定核酸酶来源于嗜热温泉tengcongensis,该酶识别缺嘌呤/缺嘧啶位点(Apurinic/apyrimidinic)核苷酸,其内切酶活性将受损DNA损伤位点进行切断,然后在其外切酶(3’-5’)活性下去除受损DNA位点,完成DNA的损伤修复。TteAP热稳定核酸酶酶极其耐热,最佳反应温度为70℃。

使用注意事项[1]

(1)1×TteAPBuffer:20mMTris,10mMMgCl2,1mMDTT(pH7.9@25℃)。

(2)该酶的最佳反应温度为70°C,90°C5min失活。

(3)该酶与PCR反应条件兼容。

主要参考资料

[1] 卫生学大辞典