冬凌草乙素的作用

背景及概述^[1][2]

冬凌草乙素在常温常压下呈白色结晶粉末状，主要来源于冬凌草，溶于甲醇，乙醇，微溶于石油醚，几乎不溶于水，在室温下较为稳定性较好，需要置于避光阴凉处保存。冬凌草乙素是从冬凌草中提取的一种烯类二萜。冬凌草又名冰凌草，具有清热解毒、消炎止痛之功效，产于我国河南、河北、山西、四川等地，也是民间治疗食管癌和胃癌的一种草药。1991年我国卫生部批准将冬凌草干燥叶及地上部分作为中药材，收入部颁中药材标准。我国从二十世纪70年代起对冬凌草的化学成分、药理作用及临床应用开始研究，并提取得到冬凌草乙素。

制备^[1]

一种冬凌草乙素的提取工艺，包括以下步骤：

1)、将冬凌草送入粉碎机进行粉碎，得到粉碎的冬凌草；

2)、将粉碎的冬凌草进行两次乙醇回流提取，从而得到提取液；

3)、将提取液进行浓缩分离，再加入40％的稀乙醇洗脱，接着采用70％的四氢呋喃和水作为结晶溶剂进行结晶过滤，得到冬凌草乙素。

作为优选，所述步骤2)中乙醇的浓度为60-85％。

本发明采用大孔吸附树脂(40％的稀乙醇)进行粗分，采用70％的四氢呋喃和水进行结晶，大大提高了冬凌草乙素的提取率，并且工艺简单，成本低。

药理作用^[2]

体内外抗癌实验表明，冬凌草乙素对很多癌细胞系都有明显的抑制杀灭作用。冬凌草乙素对休外培养的艾氏腹水癌腹水型细胞有明显细胞毒性，其50％抑制浓度为0.5μg/ml。冬凌草乙素对多种移植性肿瘤有抑制作用，它对小白鼠艾氏腹水癌，S180肝癌及L1型腹水型癌均有明显抗肿瘤作用，使存活期明显延长，并使部分动物长期存活，对网织细胞肉瘤及肝癌实体型亦有明显抗肿瘤作用。

冬凌草乙素能以时间、剂量方式显著抑制人骨髓瘤细胞系K562和HL-60细胞的增殖并诱导凋亡。用冬凌草乙素处理细胞48～72h后，可以清楚地观察到细胞凋亡。凋亡发生时，caspase-3酶原蛋白(32×103)分裂出17×103亚单位，同时相对分子质量为116×103的PARP分裂产生89×103组分。冬凌草乙素处理细胞24～48h后，Bcl-2表达下调而Bax表达上调。

制剂^[2]

实施例1、冬凌草乙素脂质体

取冬凌草乙素(20mg)、大豆磷脂(0.15g)于200ml烧瓶中，用15ml二氯甲烷溶解，减压旋转蒸发，得到一层有机脂溶性膜，加入pH7.4的磷酸盐缓冲液10ml，振荡，大部分膜 脱落，热水浴超声，直至得到均匀混悬液，显微镜下观察，大部分粒子直径小于5微米，即为冬凌草乙素脂质体.

实施例2、冬凌草乙素非离子表面活性剂泡囊

取冬凌草乙素(30mg)、司盘60(0.08g)于250ml烧瓶中，用20ml二氯甲烷溶解，减压旋转蒸发，得到一层有机脂溶性膜，加入pH7.4的Tris缓冲液10ml，振荡，大部分膜脱落，超声，直至得到冬凌草乙素非离子表面活性剂泡囊的均匀混悬液，粒度分析仪检测，平均粒径为465nm。

实施例3、冬凌草乙素长循环脂质体

取冬凌草乙素(50mg)、大豆磷脂(0.15g)、PEG化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)(0.02g)于烧瓶中，用20ml氯仿∶异丙醚(1∶1，v/v)溶解，加入适量蒸馏水，超声使其成为乳剂，减压旋转蒸发，得到凝胶态物质，加入少量水，继续减压旋转蒸发，凝胶态物质脱落并分散成均匀混悬液，显微镜下观察，大部分粒子直径小于2微米，即为冬凌草乙素长循环脂质体。

实施例4、冬凌草乙素纳米粒

取冬凌草乙素(50mg)、单硬脂酸甘油酯(0.7g)、吐温80(0.03g)于烧杯中加热至80℃，逐渐加入含十二烷基硫酸钠(10mg)的80℃水(10ml)，保持温度不变，呈透明液体。再将其用注射器注入到高速搅拌的0℃水中，呈透明液体。在原子力显微镜下观察，多为100纳米以下的粒子。该冬凌草乙素固体脂质纳米粒混悬液可常温放置10天未见沉淀析出。该固体脂质纳米粒混悬液添加适当保护剂后冻干成固体粉末，临用前加入水，即成冬凌草乙素固体脂质纳米粒混悬液。

实施例5、冬凌草乙素微球

取冬凌草乙素(50mg)、聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)(0.5g)溶于5ml二氯甲烷中，加入3％的聚乙烯醇(PVA)水溶液(20ml)，高速搅拌，形成乳液，转移至30ml的3％PVA水溶液中，在室温下，搅拌4小时，挥发二氯甲烷，微球固化。离心微球混悬液，所得微球以蒸馏水洗涤3次，加入适量甘露醇，冷冻干燥，即得到白色粉末。用少量水分散后，可在显微镜下观察到10微米以下的圆整微球，即为冬凌草乙素微球。

实施例6、冬凌草乙素乳剂

取冬凌草乙素、泊洛沙姆P188、玉米油、丙二醇加热，全溶，溶液缓慢滴入搅拌着的pH7.4磷酸缓冲液中，得到乳剂。该乳剂经过高压乳匀机循环乳化3次，得到乳滴粒径小于1微米的乳剂。该乳剂灌封于安瓿内，经过100℃加热30分钟加热。取样观察，绝大部分乳滴粒径小于5微米。该乳剂在室温放置可保持较长时间稳定。该乳剂可用于静脉注射、肌肉注射，也可以用于口服。

实施例7、冬凌草乙素纳米乳

取冬凌草乙素(50mg)溶于5ml油酸乙酯/四氢呋喃混合溶剂中，加入适量聚氧乙烯蓖麻油和单甘酯，加热搅拌成溶液，在高速搅拌条件下，加入约4ml水，持续搅拌，得到半透明状分散液体。粒度测定结果表明大部分粒子在120nm以下，即为冬凌草乙素纳米乳。

实施例8、冬凌草乙素聚合物胶束

取冬凌草乙素(10mg)溶于5ml二甲基亚砜(DMSO)中，加入50mg乳酸-羟基乙酸-乙二醇共聚物溶解，放入透析袋中，再放入盛有蒸馏水的烧杯中，搅拌24小时，取出透 析袋，测定粒度，大部分粒子在50nm以下，即为冬凌草乙素聚合物胶束.

实施例9、冬凌草乙素纳米凝胶

取冬凌草乙素(10mg)溶于5ml二甲基亚砜(DMSO)中，加入40mg胆固醇基普鲁兰溶解，用微量注射器缓慢注射到水中，测定分散液中的粒子直径，大部分粒子在80nm以下，即为冬凌草乙素纳米凝胶。

实施例10、冬凌草乙素固体分散体片剂

取5g冬凌草乙素溶解在热的100ml乙醇中，与300ml含10％聚乙烯吡咯烷酮K30的乙醇溶液混合，然后在旋转蒸发器中减压挥发尽乙醇，得到白色粉末状固体，即为冬凌草乙素的聚乙烯吡咯烷酮固体分散体。该固体分散体能快速溶于水。

取上述方法制备得到冬凌草乙素固体分散体35g，加入微晶纤维素50g，羧甲基淀粉钠10g，混匀，再加入1g硬脂酸镁，混匀，用10mm浅凹冲压片，得到白色光洁片剂，平均片重380g，含冬凌草乙素20mg。该片剂依照2005年版《中国药典》溶出度测定第二法，选用900ml水作溶出介质，转速50rpm，在45分钟取样测定冬凌草乙素溶出量，溶出百分率为93.1％。

主要参考资料

[1] CN201810687065.6 一种冬凌草乙素的提取工艺

[2] CN200910223301.X 冬凌草乙素高度分散制剂