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RnaseH核酸内切酶的介绍

发布日期:2019/4/16 13:58:11

背景及概述[1]

核酸内切酶是水解酶类中许多酶的共有名称(EC3.1.21~31)。但各有其专一性,它们催化水解多核苷酸(例如脱氧核糖核酸酶,脱氧核糖核酸内切酶,核糖核酸内切酶等)。该酶类对于DNA和RNA的代谢和修复十分重要。核糖核酸酶H(RNaseH)是1种广泛存在于原核细胞和真核细胞中的功能酶,它能有效降解RNA和DNA杂交链中的RNA链,为常用的工具酶之一。Miller等人在1973年首次从大肠杆菌中发现RNaseH随后RNaseH被克隆和定位。1990年Itaya,M.又成功证明了大肠杆菌K-12中存在第2种RNaseH(RNaseHII),同样具有降解RNA-DNA杂交链中RNA的功能。现已发现自然界主要存在两类RNaseH:Ñ型和Ò型。其中I型包括细菌RNaseHI、人的RNaseHII和逆转录酶的逆转录RNaseH结构域;而细菌RNaseHII和HIII,archaealRNaseHII、和人RNaseHI等都属于Ò型RNaseH。有些生物体细胞基因组可能存在多个RNaseH(rnh)基因,但是通常只有一个表达RNaseH蛋白。

通过序列比对发现I型和II型的序列差异明显,比如大肠杆菌的两类RNaseH仅有17%的序列相似,这些酶的序列差异表明它们在细胞中的功能不同,实验证明I型RNaseH的实际功能与RNA转录和DNA修复有关。虽然有关RNaseH功能的研究已取得了进展,但是对RNaseH的细胞类似物的功能还知之甚少。RnaseH核酸内切酶是一种特异性切割RNA/DNA双链中的核糖核苷酸的核酸内切酶,在调节免疫防御过程及维持真核生物基因组稳定方面具有重要意义。基于DNA诱导的聚噻吩构象变化,根据PMNT在DNA/PMNT二聚体和DNA/miRNA/PMNT三元复合物中构象和颜色的变化可方便地检测序列特异性的miRNA。MiRNA浓度在0.05-1.0μmol/L范围内与吸收比率成线性关系。该法可用普通的分光光度计甚至用肉眼可视法检测,这可以大大降低分析成本、提高分析的效率。同时结合RnaseH核酸内切酶的降解反应,通过测定适量的RnaseH核酸内切酶在一定的降解时间内的吸收比率,建立了RnaseH核酸内切酶活性的检测。

主要参考资料

[1] 诊断学大辞典

[2] 基于阳离子共轭聚合物的核酸及单核苷酸多态性的均相检测