PBCV DNA连接酶的介绍

背景及概述^[1]

连接酶是一种能催化两个不同或相同分子的两端相连接的酶，此反应与ATP分解反应相偶联。对于DNA损伤切除修复最后一步有连接功能的是DNA连接酶。该酶特异地催化两条DNA单链片段相联结，也就是将DNA聚合酶重新合成的DNA补片连接到切除了DNA损伤的缺口的两端。DNA连接酶还在复制和重组等过程中出现断裂时有连接作用。很可能该酶还能对诱变剂(化学断裂剂和电离辐射)所产生的DNA链断裂有直接的连接作用，只要断端是5′-PO₄和3′-OH，而且两断端相近又易拉拢。所以DNA连接酶有时能一步完成DNA链断裂的修复。对于DNA双链断裂，则似乎不是由DNA连接酶直接修复，而是先由RecA蛋白质在DNA两断端之间形成细丝使两端对准。在某种情况下，DNA断裂需要先由外切核酸酶形成一个空源，再由DNA聚合酶合成补片，然后才连接。

PBCV DNA连接酶也称为SplintR连接酶或Chorella病毒DNA连接酶，它能够高效催化相邻的DNA核苷酸的连接，这个连接过程需要一条互补的RNA在两条DNA单链间起“夹板”或“桥梁”的固定作用。PBCV DNA连接酶的这种活性远远优于传统的T4DNA连接酶，有助于miRNAs和mRNAs，包括SNPs在内的研究方法的创新。另外，在二代测序和分子诊断等众多领域中，PBCV DNA连接酶是富集目的基因的理想选择。它具有稳定的生物活性，对RNA介导固定的DNA底物亲和性强（米氏常数Km=1nM），能够在复杂的混合物中检测到亚纳摩尔级的特定RNA。因此，在RNA检测技术中，PBCV DNA连接酶不失为选择用酶。PBCV DNA连接酶主要用于单链DNA的连接、基于探针法的miRNA的检测、SNP或剪接体的检测、RASL分析。

主要参考资料

[1] 卫生学大辞典