DNaseI核酸内切酶使用注意事项

背景及概述^[1]

核酸内切酶是水解酶类中许多酶的共有名称(EC3.1.21～31)。但各有其专一性，它们催化水解多核苷酸(例如脱氧核糖核酸酶，脱氧核糖核酸内切酶，核糖核酸内切酶等)。该酶类对于DNA和RNA的代谢和修复十分重要。

DNaseI，即DeoxyribonucleaseI，中文名称为脱氧核糖核酸酶I，是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNaseI水解单链或双链DNA后的产物，5'端为磷酸基团，3'端为羟基。DNaseI活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下，DNaseI可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNaseI可在同一位点剪切DNA双链，形成平末端，或1-2个核苷酸突出的粘末端。
DNaseI核酸内切酶不含RNase(RNasefree)，可以用于各种RNA样品的处理。提供了用于DNaseI失活所需的EDTA。DNaseI核酸内切酶可用于制备不含DNA的RNA样品；RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染；体外T7，T3，SP6等RNAPolymerases催化的RNA转录后去除DNA模板；DNaseIfootprinting研究DNA-蛋白质相互作用；缺口平移(nicktranslatioin)；产生DNA随机片段文库；细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。

使用注意事项^[1]

1）通常加热方法即可失活DNaseI。如需要去除残留的变性蛋白，可在37°C消化完毕后使用酚氯仿抽提并沉淀RNA样品（不进行加热操作）。

2）10×RDStopBuffer中含有螯合剂用于去除二价阳离子，进行加热失活前，必须加入5μl10×RDStopBuffer并混合均匀，再进行热失活，否则会导致RNA降解。

3）处理完毕的RNA样品进行一步反转录反应时，添加量需要<20%（如20μl的反转录体系中加入量要<4μl）。

主要参考资料

[1]诊断学大辞典