网站主页 DNASE I 核酸内切酶 新闻专题 DNaseI核酸内切酶使用注意事项

DNaseI核酸内切酶使用注意事项

发布日期:2020/2/11 8:32:33

背景及概述[1]

核酸内切酶是水解酶类中许多酶的共有名称(EC3.1.21~31)。但各有其专一性,它们催化水解多核苷酸(例如脱氧核糖核酸酶,脱氧核糖核酸内切酶,核糖核酸内切酶等)。该酶类对于DNA和RNA的代谢和修复十分重要。

DNaseI,即DeoxyribonucleaseI,中文名称为脱氧核糖核酸酶I,是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNaseI水解单链或双链DNA后的产物,5'端为磷酸基团,3'端为羟基。DNaseI活性依赖于钙离子,并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下,DNaseI可随机剪切双链DNA的任意位点;二价锰离子存在条件下,DNaseI可在同一位点剪切DNA双链,形成平末端,或1-2个核苷酸突出的粘末端。
DNaseI核酸内切酶不含RNase(RNasefree),可以用于各种RNA样品的处理。提供了用于DNaseI失活所需的EDTA。DNaseI核酸内切酶可用于制备不含DNA的RNA样品;RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染;体外T7,T3,SP6等RNAPolymerases催化的RNA转录后去除DNA模板;DNaseIfootprinting研究DNA-蛋白质相互作用;缺口平移(nicktranslatioin);产生DNA随机片段文库;细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。

使用注意事项[1]

1)通常加热方法即可失活DNaseI。如需要去除残留的变性蛋白,可在37°C消化完毕后使用酚氯仿抽提并沉淀RNA样品(不进行加热操作)。

2)10×RDStopBuffer中含有螯合剂用于去除二价阳离子,进行加热失活前,必须加入5μl10×RDStopBuffer并混合均匀,再进行热失活,否则会导致RNA降解。

3)处理完毕的RNA样品进行一步反转录反应时,添加量需要<20%(如20μl的反转录体系中加入量要<4μl)。

主要参考资料

[1]诊断学大辞典

 

分享 免责申明

欢迎您浏览更多关于DNASE I 核酸内切酶的相关新闻资讯信息