9N2.0DNA连接酶的介绍

背景及概述^[1]

连接酶是一种能催化两个不同或相同分子的两端相连接的酶，此反应与ATP分解反应相偶联。对于DNA损伤切除修复最后一步有连接功能的是DNA连接酶。该酶特异地催化两条DNA单链片段相联结，也就是将DNA聚合酶重新合成的DNA补片连接到切除了DNA损伤的缺口的两端。DNA连接酶还在复制和重组等过程中出现断裂时有连接作用。很可能该酶还能对诱变剂(化学断裂剂和电离辐射)所产生的DNA链断裂有直接的连接作用，只要断端是5′-PO₄和3′-OH，而且两断端相近又易拉拢。所以DNA连接酶有时能一步完成DNA链断裂的修复。对于DNA双链断裂，则似乎不是由DNA连接酶直接修复，而是先由RecA蛋白质在DNA两断端之间形成细丝使两端对准。在某种情况下，DNA断裂需要先由外切核酸酶形成一个空源，再由DNA聚合酶合成补片，然后才连接。

9N2.0DNA连接酶（又名9oNDNALigase）能够催化磷酸二酯键的形成，使与同一互补靶DNA链杂交的两条相邻寡核苷酸链的5´-磷酸末端和3´-羟基末端通过磷酸二酯键相连。9N2.0DNA连接酶来源于极度耐热的海底超嗜热古菌（Thermococcussp.）9°N菌株中克隆的连接酶基因，在45℃-90℃范围内均有活性。该酶进一步经基因工程基因突变，使得耐受更高的温度，在90℃孵育15min仍然保留50%以上的活性，因此其适用于：（1）高温条件下，连接DNA链上的切刻位点；（2）与PCR反应条件兼容可用连接酶检测反应；（2）连接酶链式反应，对等位基因进行特异性检测。9N2.0DNA连接酶主要在高温条件下，连接DNA链上的切刻位点；与PCR反应条件兼容可用连接酶检测反应；连接酶链式反应，对等位基因进行特异性检测。

主要参考资料

[1]卫生学大辞典