小鼠降钙素(CT)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠降钙素(CT)ELISA试剂盒是一种专门用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中降钙素（CT）含量的实验工具。其基本原理是将抗原或抗体与酶结合，形成酶标抗原或抗体，保留其免疫活性，同时又保留酶的活性。然后将酶标抗原或抗体与固相载体表面结合，形成酶-抗原-抗体复合物。最后通过底物显色反应，根据颜色变化来检测抗原或抗体的存在。

小鼠降钙素(CT)ELISA试剂盒在具体操作过程中，试剂盒首先使用纯化的小鼠降钙素（CT）抗体包被微孔板，制成固相抗体。然后，往包被单抗的微孔中依次加入降钙素（CT），使其与固相抗体结合。接着，再加入HRP标记的降钙素（CT）抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过彻底洗涤后，加入底物TMB进行显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。最后，用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠降钙素（CT）的浓度。

小鼠降钙素(CT)ELISA试剂盒

使用小鼠降钙素（CT）ELISA试剂盒时，需要注意以下几点：

1.严格按照规定的时间和温度进行温育，以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2.洗板过程要正确，以避免不准确的结果。在加入底物前，应确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥。

3.消除板底残留的液体和手指印，否则可能影响OD值的读取。

4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

小鼠降钙素（CT）ELISA试剂盒是一种方便、准确、可靠的实验工具，可用于研究小鼠降钙素在生物学过程中的作用，以及评估相关疾病的发病机制和治疗效果。

应用^[4][5]

小鼠降钙素(CT)ELISA试剂盒可以用于葛根素通过Wnt4/β-catenin信号通路抑制绝经后骨质疏松的机制研究

研究:(1)背部双侧卵巢摘除法建立骨质疏松小鼠模型,葛根素干预骨质疏松小鼠模型,观察其对于骨质疏松小鼠的改善作用,探讨Wnt/β-catenin信号通路在骨质疏松小鼠中的作用机制;(2)将小鼠骨髓单核巨噬细胞诱导培养形成破骨细胞,葛根素干预,探讨葛根素对破骨细胞中Wnt4/β-catenin信号通路的调节作用。

通过动物和细胞实验,揭示葛根素通过Wnt4/β-catenin信号通路抑制骨质疏松的分子机制,以期为葛根素临床应用提供理论依据。

方法:(1)将10只无特定病原体(SPF)级雌性C57BL/6小鼠随机分为两组,一组为去卵巢组(OVX),一组为假手术组(Sham),通过血清生物化学法检测血清中钙(Ca)、磷(P)、镁(Mg)、碱性磷酸酶(ALP)的含量、Micro CT扫描三维重建、病理组织HE染色、TRAP/ALP染色、免疫荧光染色检测TRAP蛋白的表达量。(2)将18只无特定病原体(SPF)级雌性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham-NS)、去卵巢生理盐水组(OVX-NS)、去卵巢葛根素组(OVX-Pu),每组6只。采用背部双侧卵巢摘除法建立C57BL/6小鼠骨质疏松模型,模型鉴定成功后,Sham-NS组不摘除卵巢,腹腔注射生理盐水;OVX-NS组去除双侧卵巢,腹腔注射生理盐水;OVX-Pu组摘除卵巢后通过腹腔注射2.5mg/100μL/只葛根素溶液,连续给药12周/d,每天观察小鼠的行为学变化;小鼠降钙素(CT)ELISA试剂盒血清生物化学检测方法检测钙磷镁、碱性磷酸酶、骨代谢三项甲状旁腺激素(PTH)、降钙素(CT)、骨钙素(BGP)等生化指标的变化水平;病理组织化学染色和影像学检测小鼠股骨组织的病理改变情况;Real time PCR检测用药干预前后骨组织中Wnt4、β-catenin、C-myc、Cyclin D1、s FRP2、TCF1等相关指标m RNA的相对表达水平;免疫组织化学染色测定股骨组织中Wnt4、β-catenin、Cyclin D1、HNF以及s FRP2蛋白含量的表达。

参考文献

[1]WNT Signaling and Bone:Lessons From Skeletal Dysplasias and Disorders.[J].Huybrechts Yentl;;Mortier Geert;;Boudin Eveline;;Van Hul Wim.Frontiers in endocrinology,2020

[2]Bisphosphonate-Induced Osteonecrosis of the Jaws(BIONJ).[J].Singh Madhumati;;Gonegandla Giriraj Sandeep.Journal of maxillofacial and oral surgery,2020

[3]Pharmacological Therapy of Osteoporosis:What's New?[J].Iolascon Giovanni;;Moretti Antimo;;Toro Giuseppe;;Gimigliano Francesca;;Liguori Sara;;Paoletta Marco.Clinical interventions in aging,2020

[4]Integrin-associated molecules and signalling cross talking in osteoclast cytoskeleton regulation.[J].Kong Lingbo;;Wang Biao;;Yang Xiaobin;;He Baorong;;Hao Dingjun;;Yan Liang.Journal of cellular and molecular medicine,2020

[5]李兰.葛根素通过Wnt4/β-catenin信号通路抑制绝经后骨质疏松的机制研究[D].右江民族医学院,2022.