基因克隆服务

背景^[1-7]

基因克隆服务广泛应用于目的蛋白的表达、构建表达载体，从而用于研究基因功能等实验。杭州标诚科技有限公司提供成熟、高效的基因克隆服务。基因克隆技术包括把来自不同生物的基因同有自主复制能力的载体DNA在体外人工连接，构建成新的重组DNA，然后送入受体生物中去表达，从而产生遗传物质和状态的转移和重新组合。因此基因克隆技术又称为分子克隆、基因的无性繁殖、基因操作、重组DNA技术以及基因工程等。

基因克隆服务采用重组DNA技术，将不同来源的DNA分子在体外进行特异切割，重新连接，组装成一个新的杂合DNA分子。在此基础上，这个杂合分子能够在一定的宿主细胞中进行扩增，形成大量的子代分子DNA。在基因研究和生物药物开发的过程中，基因克隆作为最基本的手段应用极为广泛。全长人类功能基因，尤其具有一批癌症、炎症及免疫疾病相关基因可供研究人员直接使用。

基因克隆服务流程：

1.选择目的基因,并设计相应引物；

2.用引物PCR扩增目的基因片段；

3.选择合适（抗性标记、酶切位点等）的克隆载体（为了保真扩增）,并将PCR片段连接入克隆载体中；（一般用Taq酶的PCR产物在末尾会自带一个A,可在Solution 1作用下与两端各带一个T的线性T载体直接相连）

4.将连接产物转化入感受态大肠杆菌,使之在含有抗生素的培养基上生长扩增；

5.从大肠杆菌中提取质粒（即前面的连接产物）,酶切鉴定和测序鉴定均无误后将目的基因片段切下并与新的表达载体连接,然后再次转化入大肠杆菌中扩增,再提质粒,即得到想要的目的基因片段克隆。

服务类型：

1.cDNA克隆产品及服务

应用人、小鼠、大鼠等多个物种约10万个cDNA克隆，是当前数量最多、最完备的基因库。对这些cDNA克隆进行描述，包括NCBI序列号、别名、CDS区、氨基酸序列及克隆载体等，每一个ORF克隆的插入片段都进行了全长测序，能够保证氨基酸序列与GenBank中相应克隆的参考氨基酸序列一致。

2.ORF克隆产品及服务

经过严格筛选从10000多个人类全长基因中得到的全长蛋白编码ORF克隆。这个筛选过程包括从多个数据库中提取基因序列，利用计算机和人工进行比较和确认；基因序列校正、优化等步骤。

3.TA克隆服务

TA克隆技术（TA cloning）利用Taq聚合酶具有末端转移酶（TdT）活性，但却不具有3'-5'端外切酶校准活性的特点，可在PCR产物的3'端加上一个非模板依赖碱基“A”。所以TA克隆不需使用含限制酶序列的引物，不需将PCR产物进行优化，不需把PCR产物做平端处理，不需在PCR扩增产物上加接头，即可直接进行克隆。TA克隆是目前克隆PCR产物最简便、快捷的方法。安必奇拥有成熟的技术和完善的服务流程，能完成任何复杂、即用的TA克隆服务。

应用^[8][9]

基因克隆服务可用于功能基因的大量扩展以及功能研究：

绿原酸是金银花在生长发育过程中产生的重要次生代谢产物。在金银花绿原酸合成途径关键酶基因克隆与功能分析实验中从基因克隆、基因结构与功能的生物信息学预测、基因表达等不同的方面对金银花绿原酸生物合成过程中重要的三个关键酶基因进行了相关研究，既为研究金银花绿原酸的生物合成机制奠定基础，也为基因工程在代谢工程的应用提供一定的借鉴。

采用RT-PCR及RACE方法从金银花中分离到绿原酸合成紧密相关的LjHCT、LjC3H1及LjCCoAOMT1基因的全长CDS序列，LjHCT基因CDS全长1293，编码430个氨基酸，LjC3H1基因CDS全长1533，编码510个氨基酸，LjCCoAOMT1基因CDS全长744，编码267个氨基酸。

参考文献

[1]Luteolin from Purple Perilla mitigates ROS insult particularly in primary neurons[J].Gang Zhao,Chen Yao-Yue,Guo-Wei Qin,Li-He Guo.Neurobiology of Aging.2012(1)

[2]Luteolin promotes long-term potentiation and improves cognitive functions in chronic cerebral hypoperfused rats[J].Bei Xu,Xiao-Xiu Li,Guo-Rong He,Juan-Juan Hu,Xin Mu,Shuo Tian,Guan-Hua Du.European Journal of Pharmacology.2009(1)

[3]Establishment of a high efficiency Agrobacterium-mediated transformation system of rice(Oryza sativa L.)[J].Kenjirou Ozawa.Plant Science.2009(4)

[4]Substrate preferences of O‐methyltransferases in alfalfa suggest new pathways for 3‐O‐methylation of monolignols[J].DianjingGuo,Jack W.Blount.The Plant Journal.2008(2)

[5]MEGA:A biologist-centric software for evolutionary analysis of DNA and protein sequences[J].Sudhir Kumar,Masatoshi Nei,Joel Dudley,Koichiro Tamura.Briefings in Bioinformatics.2008(4)

[6]A new gene coding for p-coumarate 3-hydroxylase from Ginkgo biloba[J].X.Liu,Z.Deng,S.Gao,X.Sun,K.Tang.Russian Journal of Plant Physiology.2008(1)

[7]Erwinia carotovora ssp.carotovora Infection Induced“Defense Lignin”Accumulation and Lignin Biosynthetic Gene Expression in Chinese Cabbage(Brassica rapa L.ssp.pekinensis)[J].Song‐HeZhang,QingYang,Rong‐CaiMa.Journal of Integrative Plant Biology.2007(7)

[8]Chlorogenic acid synthesis in coffee:An analysis of CGA content and real-time RT-PCR expression of HCT,HQT,C3H1,and CCoAOMT1 genes during grain development in C.canephora[J].Maud Lepelley,Gerald Cheminade,Nicolas Tremillon,Andrew Simkin,Victoria Caillet,James McCarthy.Plant Science.2007(5)

[9]蒋向辉.金银花绿原酸合成途径关键酶基因克隆与功能分析[D].湖南大学,2013.