小鼠内毒素(ET)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠内毒素(ET)ELISA试剂盒是一种专门用于检测小鼠体内内毒素水平的实验工具。该试剂盒基于酶联免疫吸附测定（ELISA）原理，通过特定的抗体与小鼠体内的内毒素结合，进而测量其含量。

小鼠内毒素(ET)ELISA试剂盒原理：该试剂盒通常基于固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）原理，通过特定的抗体与内毒素结合，再利用酶标记的二抗产生颜色反应，颜色的深浅与样品中内毒素的浓度成正比关系。具体来说，操作步骤包括将待测样品加入至微孔板中，样品中的内毒素与生物素标记的抗体结合，然后加入亲和素标记的辣根过氧化物酶（HRP），经过一系列的温育和洗涤步骤后，去除未结合的物质，加入底物发生颜色变化，通过酶标仪读取吸光度值（OD值），根据标准曲线计算出样品中内毒素的含量。

试剂盒通常包含必要的试剂、酶标板、标准品、洗涤液等，以及详细的操作说明书。使用前，用户需要仔细阅读说明书，了解实验步骤和注意事项。一般而言，使用这种试剂盒进行实验，首先需要将样本（如血清、血浆或组织匀浆）与试剂盒中的抗体进行反应，然后通过洗涤去除未结合的杂质，再加入酶标二抗进行反应，最后加入底物显色并测量吸光度，从而计算出样本中的内毒素含量。

小鼠内毒素(ET)ELISA试剂盒

这种试剂盒具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点，广泛应用于科学研究、医学诊断等领域。同时，不同的试剂盒可能具有不同的检测限、适用范围等特性，用户在选择时需要根据自己的实验需求进行考虑。

此外，在使用小鼠内毒素（ET）ELISA试剂盒时，用户需要注意一些安全和操作规范，如避免试剂的交叉污染、保持实验环境的清洁和卫生、正确处理废弃物等。同时，对于实验结果的分析和解读，也需要结合实验设计和目的进行综合考虑。

应用^[4-5]

小鼠内毒素(ET)ELISA试剂盒可以用于Twist-2在Kupffer细胞内毒素耐受形成机制的实验研究

内毒素(Endotoxin)又称脂多糖(lipoplysacchride,LPS)是G-细菌细胞壁上的主要成分和主要的致病成分,其具有广泛的生物活性,通过引起炎症细胞释放TNF-α等大量炎症介质,导致全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)及多器官功能障碍。

通过内毒素预处理建立内毒素耐受小鼠模型及体外Kupffer细胞模型,观察在内毒毒耐受状态下机体及细胞中Twist-2表达的变化,初步确定Twist-2与内毒素耐受的关系;进而采用特异性RNA干扰技术在体外沉寂Twist-2的基因表达,观察Kupffer细胞内毒素耐受性的改变;由此阐明Twist-2在内毒素耐受形成中的作用及机制,从而为脓毒症的临床治疗提供新的干预靶点和手段。

Twist-2在内毒素耐受小鼠肝组织中表达变化及意义的研究目的建立内毒素耐受小鼠模型,观察内毒素耐受小鼠接受大剂量LPS刺激前后Twist-2在肝组织中的表达变化情况,从机体水平初步探讨Twist-2与内毒素耐受之间的关系。

方法：通过对实验动物处理方式的不同,随机分为内毒素非耐受组(NETT)和耐受组(ETT)。比较两组实验动物的一般情况;光镜观察肝组织病理学改变;电镜观察肝脏细胞超微结构改变;转录因子分析试剂盒检测NF-κB活性;小鼠内毒素(ET)ELISA试剂盒检测血浆中的TNF-α水平;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织TNF-α及Twist-2的mRNA表达水平。

小鼠内毒素(ET)ELISA试剂盒结果(1)成功建立了内毒素耐受小鼠模型;(2)EET组小鼠各时相点血浆TNF-α含量、肝组织中TNF-α表达明显减弱、肝组织中NF-κB活性显著降低(P<0.05);(3)NETT组在LPS刺激24h后才能在肝组织中检测到Twist-2的mRNA表达,而ETT组肝组织中Twist-2 mRNA表达在0h时已能检测,并在LPS刺激后迅速上调,于6h时达高峰,24h时其表达强度仍为非耐受组2.5倍。结论LPS预处理能成功诱导小鼠内毒素耐受;肝组织中Twist-2高表达表达及Kupffer细胞活化受到抑制可能与内毒素耐受的形成有关。

参考文献

[1]Early potassium channel blockade improves sepsis‐induced organ damage and cardiovascular dysfunction[J].R Sordi;;D Fernandes;;BT Heckert;;J Assreuy.British Journal of Pharmacology,2011(6)

[2]Adjunctive homeopathic treatment in patients with severe sepsis:a randomized,double-blind,placebo-controlled trial in an intensive care unit[J]..Homeopathy,2011(1)

[3]The role of intestinal endotoxin in liver injury:A long and evolving history[J].James P.Nolan.Hepatology,2010(5)

[4]Impact of time to antibiotics on survival in patients with severe sepsis or septic shock in whom early goal-directed therapy was initiated in the emergency department[J].David F.Gaieski;;Mark E.Mikkelsen;;Roger A.Band;;Jesse M.Pines;;Richard Massone;;Frances F.Furia;;Frances S.Shofer;;Munish Goyal.Critical Care Medicine,2010(4)

[5]游海波.Twist-2在Kupffer细胞内毒素耐受形成机制的实验研究[D].重庆医科大学,2011.