胶原蛋白酶的作用特点以及在细胞培养中的应用

胶原蛋白酶是能在一定的 pH 和温度下切割胶原蛋白主体螺旋多肽链的酶类，主要用于水解结缔组织中的胶原蛋白，适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织等。当拟消化的组织较硬，内含较多的结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞效果较差，可采用胶原酶解离细胞法。钙、镁离子以及血清不会影响胶原酶的消化作用，其消化作用缓和，且无需机械振荡。

分类

许多动物的组织细胞和微生物都是胶原蛋白酶的来源，其中细菌是微生物胶原蛋白的主要来源，已发现40 多种。目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为 4 种类型：

（1）胶原酶Ⅰ型：含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原蛋白酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性），通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备。

（2）胶原酶Ⅱ型：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备。

（3）胶原酶Ⅲ型：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备。

（4）胶原酶Ⅳ型：含有低胰酶活性，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。

细胞培养应用

原代培养是从供体获取组织或细胞进行的首次培养，也叫初代培养。由于取得的组织和细胞刚刚离体，生物性状尚未发生较大变化，具有二倍体遗传性状，在供体来源充分、条件稳定的情况下（年龄、性别），能在一定程度上反映体内状态。原代培养的组织通常由多种细胞成分组成，较为复杂，即使培养较纯的单一类型的细胞，如上皮或成纤维细胞，也仍然存在着异质性。正因如此，胶原蛋白酶可在原代细胞培养中的酶消化培养法中使用，以便将组织块分散成细胞团或单个细胞，使细胞从培养液中摄取营养和排出代谢产物，从而达到细胞快速长成单层的目的。本法尤适用于培养大量组织，细胞产量高。