BIK抗体的应用

背景^[1-3]

BIK抗体其英文名为BIK Antibody，也被称为BCL2 interacting killer、Apoptosis inducer NBK、BIP 1以及BIP。它属于促凋亡Bcl-2家族蛋白的成员。尽管BIK缺乏Bcl-2的同源区域BH1和BH2，但它能与Bcl-2和Bcl-xL发生相互作用。BIK通过激活caspase来诱导凋亡。

此外，对于BIK抗体的研究应用，它常被用于研究细胞凋亡、癌症发生发展以及药物筛选等领域。通过检测BIK抗体的表达水平，可以了解细胞凋亡的状态，进而为相关疾病的诊断和治疗提供线索。

BIK抗体

BIK抗体使用步骤：

样本准备：根据实验需要，准备适当的样本，如细胞裂解液、组织提取物或血清等。确保样本的质量和数量满足实验要求。

抗体稀释：按照产品说明书或实验需求，将BIK抗体稀释至适当的浓度。通常，抗体会与一定的缓冲液或稀释液混合。

免疫反应：将稀释后的BIK抗体与样本进行孵育，使抗体与样本中的目标分子结合。这一步可能需要一定的时间和温度条件。

洗涤：孵育完成后，通过洗涤步骤去除未结合的抗体和杂质，以减少背景干扰。

检测与分析：使用适当的检测方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹（Western blot）或流式细胞术等，来检测和分析BIK抗体的结合情况。根据实验的具体要求，可能还需要进行信号放大、显色或定量等操作。

应用^[4-5]

BIK抗体可以用于RHBDD1在非小细胞肺癌中的表达及其在增殖和凋亡中的作用和机制研究

RHBDD1是Rhomboid家族的新成员,在多种恶性肿瘤中过表达,包括非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)等,RHBDD1表达水平升高与NSCLC患者总体低生存率相关。RHBDD1切割促凋亡Bcl-2家族蛋白BIK,高度调控细胞凋亡。因此,肿瘤组织中RHBDD1的高表达可以通过阻止细胞凋亡直接影响肿瘤的进展。

[方法]1.使用在线工具GEPIA2(http://gepia2.cancer-pku.cn/)分析来源于TCGA(The Cancer Genome Atlas,https://portal.gdc.cancer.gov/)数据库的肺腺癌和肺鳞状细胞癌临床样本中RHBDD1的表达水平。同时,通过在线数据分析RHBDD1表达水平于非小细胞肺癌病理分期的相关性。此外,我们还使用Kaplan Meier Plotter数据库(http://kmplot.com/analysis/)分析RHBDD1表达量与非小细胞肺癌患者预后的相关性。除了应用数据库中的数据,我们也在所收集的临床样本中,应用RT-qPCR和免疫组织化学方法检测RHBDD1在NSCLC组织中的表达水平及定位。再者,我们还应用SPSS软件统计分析了NSCLC组织中RHBDD1表达水平与临床病理因素的关系。

2. 免疫印迹法检测RHBDD1在非小细胞肺癌细胞系中的表达水平。在GENEBANK数据库中查找人RHBDD1基因序列,构建靶向RHBDD1基因的敲降和过表达载体,并在非小细胞肺癌细胞系H1299和A549中对RHBDD1进行敲降和过表达,通过CCK-8检测细胞活性,细胞克隆实验分析RHBDD1体外细胞增殖中的作用。流式细胞术实验检测RHBDD1对细胞周期的调节作用。进行异种移植瘤实验在小鼠体内验证RHBDD1对肿瘤生长的影响,BIK抗体免疫组化方法检测肿瘤增殖相关分子的表达水平。ELISA检测TGF-α分泌水平,免疫印迹测定EGFR/Raf/MEK/ERK信号通路的磷酸化水平,CCK-8实验评估EGFR或MEK抑制剂处理后H1299或A549细胞的活性,克隆形成实验检测EGFR或MEK抑制剂处理后H1299或A549细胞的增殖能力。

3.流式细胞术和BIK抗体检测细胞凋亡情况,免疫印迹实验测定剪切后的Caspase 3和Caspase 7的蛋白表达量以及全长BIK和降解后BIK的蛋白表达水平,免疫荧光实验检测K48泛素链(K48-Ub)的修饰水平。

RHBDD1基因敲除导致BIK切割减少,反之亦然;应用蛋白酶体抑制剂处理细胞可阻断这种作用。同时,我们还检测了泛素化蛋白K48的修饰水平,发现RHBDD1在H1299细胞中的过表达促进内源性K48泛素化蛋白的积累。相反,RHBDD1的敲降进一步抑制K48多泛素化蛋白的表达。

参考文献

[1]RHBDD1 promotes proliferation,migration,invasion and EMT in renal cell carcinoma via the EGFR/AKT signaling pathway.[J].Li Mingyang;Cai Licheng;Wang Xingyuan;Yu Yipeng;Jian Wengang;Bao Guochang;Gao Zhiming;Guo Junsheng;Zhang Jian;Li Chunsheng;Zhang Cheng.Molecular medicine reports,2021

[2]Phosphorylation of CAP1 regulates lung cancer proliferation,migration,and invasion.[J].Zeng Jie;Li Xuan;Liang Long;Duan Hongxia;Xie Shuanshuan;Wang Changhui.Journal of cancer research and clinical oncology,2021

[3]A Novel Tumor Suppressor Gene,ZNF24,Inhibits the Development of NSCLC by Inhibiting the WNT Signaling Pathway to Induce Cell Senescence[J].Pang Bo;Wang Yong;Chang Xiaoyan.Frontiers in Oncology,2021

[4]Targeting the Epidermal Growth Factor Receptor in EGFR-Mutated Lung Cancer:Current and Emerging Therapies.[J].Khaddour Karam;Jonna Sushma;Deneka Alexander;Patel Jyoti D;Abazeed Mohamed E;Golemis Erica;Borghaei Hossein;Boumber Yanis.Cancers,2021

[5]许哲源.RHBDD1在非小细胞肺癌中的表达及其在增殖和凋亡中的作用和机制研究[D].昆明医科大学,2023.