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兔多克隆抗体制备服务的流程

发布日期:2020/2/5 10:44:14

背景及概述[1][2]

将抗原性物质免疫动物,由于这种物质多由不止一种抗原分子组成,有时即使是一种,也是由多种抗原决定簇组成,这种抗原可刺激具有相应抗原受体的不同淋巴细胞克隆,因此产生多种抗血清抗体——多克隆抗体。兔多克隆抗体以制备周期短、识别表位多、可以进行沉淀反应及凝集反应等优点,一直是科学研究工作者的重要工具。

服务内容[2] 

1、客户可提供抗原用于制备多克隆抗体,抗原可包含:天然蛋白、重组蛋白、细胞或细胞提取液、病毒或病原体、菌种或菌体蛋白、小分子多肽、化合物;其中小分子多肽和化合物等半抗原免疫前需偶联载体蛋白。

2、客户可提供蛋白名称、GeneID、核酸序列、氨基酸序列等信息,根据客户的实验需求设计抗原,合成多肽抗原或表达蛋白抗原,免疫动物制备多克隆抗体。

3、可提供抗体标记、抗体对筛选、试剂盒开发、免疫学检测等增值服务。

服务的流程[2]

服务步骤及内容

周期

交付内容

交付标准

抗原制备

 

抗原复核

1-2 天

• 2*0.5 mL/兔子免疫前血清

• 纯化抗体(每只兔 30-40 mL 血清将全部用于纯化)

• CoA

• 剩余抗原

血清 ELISA 效价>1:64,000

UV 及 SDS- PAGE 分析

免疫及血清效价检测

8-10 周

• 免疫前采血

• 2 只兔子免疫

• 血清效价检测

• 最终采血

纯化(可选)

3 天

• 蛋白 A 亲和纯化

• 抗原亲和纯化(依客户要求选择纯化方法)

QC 分析

       3 天

• SDS-PAGE 及 UV 分析

• ELISA 检测

抗原要求[2]

蛋白抗原:

蛋白总量为 2.5-4 mg/只兔子,分子量>10kD,电泳纯度>90%,浓度>0.5 mg/mL,缓冲液为 PBS 或经义翘确认对实验无影响的溶液。

多肽抗原: 

 KLH/VLP 偶联多肽总量 3-5 mg/只兔子,浓度>0.5 mg/mL,缓冲液为 PBS 或经义翘确认对实验无影响的溶液;

OVA/Biotin 标记多肽总量 2-3 mg,浓度>0.1 mg/mL,缓冲液为 PBS 或经义翘确认对实验无影响的溶液。

参考文献

[1] 儿科学辞典

[2] 兔多克隆抗体制备服务技术说明书

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