超灵敏度化学发光液是什么?
发布日期:2024/3/13 13:54:14
超灵敏度化学发光液试剂盒是化学发光系统,也称为超敏型ECL发光液,用于检测固定在膜上的蛋白或核酸,灵敏度高,背景低,检测灵敏度可达高飞克(femtogram)级,适用于检测痕量蛋白或核酸。
检测原理
超灵敏度化学发光液试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶(HRP)的抗体、抗原或者核酸。蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上,以HRP标记的抗体或探针结合膜上的目的蛋白或核酸,洗膜后置于用本产品配制的ECL工作液中,室温孵育数分钟,HRP使工作液中的鲁米诺(Luminol)氧化并发光,试剂中添加的增强剂可以使得这种发光大大增强。此光经X光胶片或者电子装置感光记录下来,可清晰显示蛋白质或核酸条带。
使用方法
1.印迹膜制备:执行常规电泳、转膜、HRP标记的抗体或者HRP标记的核酸探针孵育、洗膜;ECL工作液含有HRP催化的发光底物,检测系统必须基于HRP酶标记的抗体或者核酸探针。充分的洗涤对于降低背景非常重要,所有步骤均在室温下完成。
2.ECL工作液的配置:在使用前取等量A液和B液,混合均匀并尽快使用;将膜片置混合液中,于室温下孵育约1分钟,每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2 ml以覆盖全膜片,注意不要在膜片表面形成气泡。
3.蛋白或核酸信号显现:
1).用平头镊钳住膜片,垂直置于吸水纸上以吸去过量试剂,仅留下少量液体覆盖表面,不可让膜完全干燥;
2).将膜片置于保鲜膜上,吸附蛋白面朝上,小心赶尽气泡;
3).用电子装置感光,或在暗室中用X光片曝光;
4).根据信号强弱适当调整曝光时间,也可选择不同时间多次曝光,以取得更佳效果。
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