胰脏星状细胞的应用

背景^[1-3]

胰脏星状细胞（Pancreatic Stellate Cells，胰脏星状细胞）是胰腺中的一种特殊细胞类型，在胰腺纤维化的过程中扮演着重要角色。胰脏星状细胞被证实与胰腺纤维化有着密切的关联，它们的活化是导致胰腺纤维化的中心环节。

在健康状态下，胰脏星状细胞通过调节细胞外基质（Extracellular Matrix，ECM）的合成和降解来维持胰腺的正常组织结构。然而，当胰腺受到损伤或炎症的影响时，胰脏星状细胞会从静息状态转化为活化状态，此时的它们会表现出肌成纤维细胞的形态，并大量分泌细胞外基质成分。这导致了胰腺腺泡周围结缔组织的大量增生，即胰腺纤维化。

此外，胰脏星状细胞还被发现具有其他多种功能，如作为前体细胞、免疫细胞和胰腺外分泌介质细胞等。在胰腺癌细胞的存在下，胰脏星状细胞还被证实与其存在紧密的联系，有助于肿瘤细胞的转移。

目前，胰脏星状细胞已成为研究胰腺纤维化、慢性胰腺炎和胰腺癌等疾病的重要靶点。针对胰脏星状细胞的活化或抑制因素的研究，以及通过调节胰脏星状细胞的功能来逆转胰腺纤维化的可能性，都是当前研究的热点。

胰脏星状细胞

胰脏星状细胞系培养操作

1)复苏胰脏星状细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)胰脏星状细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)胰脏星状细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

胰脏星状细胞可以用于Hic-5通过NF-κB（p65）/IL-6信号通路参与调控慢性胰腺炎的机制研究

从组织学和细胞学层面研究胰脏星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs)中Hic-5对慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)的影响,并探索其对下游通路的表达调控。探讨CP新的治疗靶点,为CP的治疗提供新的方法和可能的实验室依据。

方法:1.对人胰腺组织进行H&E染色、免疫组化和蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)等实验检测Hic-5在CP患者中的表达情况。

2. 以随机数表法将8-12周龄大小的野生型(wild type,WT)和Hic-5敲除(knock out,KO)C57BL/6雄性小鼠分为对照组和模型组,每组5只,共四组。模型组以雨蛙素腹膜内注射诱导CP小鼠模型。在动物层面分析Hic-5对CP的影响。通过H&E染色、Masson三色染色和天狼星红染色分析小鼠胰腺纤维化情况。以酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组化、WB和实时定量聚合酶链式反应(reverse-transcription and quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)等方法检测小鼠炎性因子、纤维化相关指标和下游通路的变化情况。

3. 分别以胶原酶消化法和密度梯度离心法分离WT和Hic-5 KO小鼠中胰腺腺泡细胞及胰脏星状细胞。在细胞层面分析Hic-5的表达情况及对PSCs活化的影响。以WB法检测Hic-5在两种细胞中的表达情况。通过细胞增殖实验、Transwell实验和伤口愈合实验检测Hic-5对胰脏星状细胞增殖能力和细胞迁移能力的影响。

4. 予不同浓度的雷公藤甲素(NF-κB/p65抑制剂)处理原代PSCs,在细胞层面分析NF-κB/p65对PSCs活化的影响。通过胰脏星状细胞增殖实验、Transwell实验和伤口愈合实验检测NF-κB/p65抑制后对细胞增殖能力和迁移能力的影响。

参考文献

[1]Berberine attenuates severity of chronic pancreatitis and fibrosis via AMPK-mediated inhibition of TGF-β1/Smad signaling and M2 polarization[J].Sapana Bansod;;Nandkumar Doijad;;Chandraiah Godugu.Toxicology and Applied Pharmacology,2020

[2]Isoliquiritigenin ameliorates caerulein-induced chronic pancreatitis by inhibiting the activation of PSCs and pancreatic infiltration of macrophages.[J].Wang Li-Juan;;He Lin;;Hao Lu;;Guo Hong-Lei;;Zeng Xiang-Peng;;Bi Ya-Wei;;Lu Guo-Tao;;Li Zhao-Shen;;Hu Liang-Hao.Journal of cellular and molecular medicine,2020

[3]Preventive Effects of Gardenia jasminoides on Cerulein-Induced Chronic Pancreatitis.[J].Choi Ji-Won;;Jeong Jun-Hyeok;;Jo Il-Joo;;Kim Dong-Gu;;Shin Joon Yeon;;Kim Myoung-Jin;;Choi Byung-Min;;Shin Yong Kook;;Song Ho-Joon;;Bae Gi-Sang;;Park Sung-Joo.The American journal of Chinese medicine,2020

[4]Serotonin-RhoA/ROCK axis promotes acinar-to-ductal metaplasia in caerulein-induced chronic pancreatitis[J].Xufeng Tao;;Qing Chen;;Ning Li;;Hong Xiang;;Yue Pan;;Yueyang Qu;;Dong Shang;;Vay Liang W.Go;;Jing Xue;;Yongwei Sun;;Zhigang Zhang;;Junchao Guo;;Gary Guishan Xiao.Biomedicine&Pharmacotherapy,2020

[5]陈浩.Hic-5通过NF-κB（p65）/IL-6信号通路参与调控慢性胰腺炎的机制研究[D].西南医科大学,2022.