pRb1的应用

背景^[1-3]

pRb1细胞是指那些表达Rb1基因（也称为pRb基因）的细胞。Rb1基因编码的蛋白质pRb1是一个关键的细胞周期调控因子，通过与E2F转录因子家族的成员相互作用来抑制细胞从G1期进入S期。这种调控机制确保了细胞在分裂前能够完成必要的生长和修复过程。

在正常的细胞中，pRb1蛋白通过抑制E2F转录因子的活性来维持细胞的生长控制。然而，在某些情况下，如癌症中，Rb1基因可能会发生突变或缺失，导致pRb1蛋白的失活或表达减少。这种情况下，细胞失去了对E2F的抑制，导致细胞过度增殖，进而可能发展成为肿瘤。

pRb1细胞在研究中通常用于研究Rb1基因的功能、细胞周期调控机制以及癌症的发生和发展。通过操纵pRb1的表达或活性，科学家们可以深入了解其在细胞生长和分裂中的重要作用，并可能为癌症治疗提供新的思路和方法。

pRb1

pRb1细胞系培养操作

1)复苏pRb1细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)pRb1细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)pRb1细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

pRb1细胞可以用于基于转录组测序及生物信息学分析鉴定复发性鼻息肉相关的基因与通路

基于高通量测序技术通过对复发性鼻息肉组织m RNA差异性比较,筛选与复发性鼻息肉的发生、发展相关的mRNA,寻找潜在的复发性鼻息肉的作用靶点,为临床用药提供依据。

方法:1.选取10例复发性鼻息肉患者的鼻息肉组织,pRb1细胞以及10例鼻中隔偏曲、鼻骨骨折患者的正常鼻甲黏膜标本进行全转录组测序。

2. 使用Illumina Nova Seq6000测序仪,选用PE150模式对上述标本进行测序。使用edge R对上述两组测得的reads进行比对,筛选出pRb1细胞差异表达基因(筛选条件:q-value<=0.05,Fold-change>=2)。3.将上述基因在GO和KEGG数据库中进行GO和KEGG富集分析以及蛋白互作网络分析。

结果:本研究通过转录组测序共检出32797个基因,其中实验组相对对照组的差异表达基因有552个,GO富集分析显示这些差异基因参与了STAT蛋白入核等生物过程,与免疫突触等细胞组分有关,与趋化因子受体活性等分子功能有关。KEGG富集分析发现复发性鼻息肉的发生发展可能与原发性免疫缺陷、粘蛋白型O-聚糖生物合成、唾液分泌等通路密切相关。之后,我们还构建了蛋白互作网络,并筛选出了节点度最高的中枢基因PTPRC,并发现其与原发性免疫缺陷通路密切相关,可能是治疗鼻息肉的一个潜在靶点。

结论:1.利用全转录组测序及多种生物信息学工具,我们对复发性鼻息肉的基因表达谱进行了全面的分析,确定了如CD37、pRb1细胞、MUC7、PTPRC等与复发性鼻息肉作用机制相关几个关键基因,原发性免疫缺陷、粘蛋白型O-聚糖生物合成、唾液分泌等与复发性鼻息肉作用机制相关的信号通路。2.通过蛋白互作网络分析,我们认为,PTPRC可能是复发性鼻息肉发生的一个潜在的重要因子。3.本研究结果可能为复发性鼻息肉患者的治疗策略提供新的视角,然而,需要进一步的实验和大样本量的额外研究来证实这些发现。

参考文献

[1]STAT proteins:a kaleidoscope of canonical and non-canonical functions in immunity and cancer[J].Awasthi Nagendra;Liongue Clifford;Ward Alister C..Journal of Hematology&Oncology,2021

[2]Interaction of Interleukin 7 Receptor(IL7R)and IL6 Gene Polymorphisms with Smoking Associated with Susceptibility to Asthma in Chinese Han Adults.[J].Du JunWei;Xu ZeLan;Xu QinXing.Immunological investigations,2021

[3]The influence of nasal microbiome diversity and inflammatory patterns on the prognosis of nasal polyps[J].Gan Weigang;Zhang Hongting;Yang Fengjuan;Liu Shixi;Liu Feng;Meng Juan.Scientific Reports,2021

[4]Crocin treatment promotes the oxidative stress and apoptosis in human thyroid cancer cells FTC-133 through the inhibition of STAT/JAK signaling pathway.[J].Zhang Yonggang;Zhu Meng;Krishna Mohan Surapaneni;Hao Zhi.Journal of biochemical and molecular toxicology,2020

[5]郭瑞康.基于转录组测序及生物信息学分析鉴定复发性鼻息肉相关的基因与通路[D].贵州医科大学,2023.