羊多克隆抗体制备

背景^[1-6]

羊多克隆抗体制备使用羊进行免疫，收集血清后，或直接使用抗血清进行检测，或进行纯化获取纯化的抗体。多克隆抗体是由免疫的宿主通过不同来源（多克隆）的B细胞分泌产生的抗体。一组多克隆抗体应识别同一抗原，同时由于是多克隆，所以往往对同一抗原的多个不同表位进行识别。多克隆抗体制备原理：抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。

一般而言，抗体按靶位点不同主要分为单克隆抗体和多克隆抗体，由多个B淋巴细胞克隆产生的，受到多种抗原决定簇刺激并可以与多种抗原表位结合的抗体就是多克隆抗体。多克隆抗体优势：制备成本比同物种来源的单克隆抗体低；制备周期较同物种来源的单克隆抗体短；可同时检测同一抗原的多个表位；适用于免疫沉淀、ELISA等实验；更高的亲合力（avidity）；抗原有两个基本特性，即抗原性和免疫原性。

有抗原性的物质不一定有免疫原性，所以由此引出半抗原和完全全抗原，半抗原必须经过经过一定的改造（偶联蛋白载体BSA，OVA或者HSA等大分子物质）方能成为完全。一般而言完全抗原分子量越大（大于10KDa），结构越复杂引起免疫反应的能力也就越强。抗体就是能与特异性抗原结合的免疫球蛋白，抗体一般分为多克隆抗体和单克隆抗体，多克隆抗体能与抗原的多个表位结合。

多抗一般制备流程：完全抗原的准备→兔子的免疫→效价检测和终放→抗体亲和纯化→抗体的浓缩和保存。

应用^[7][8]

羊多克隆抗体制备可用于小分子、多肽、修饰多肽、蛋白、融合蛋白、修饰蛋白的杂交细胞种类及效价检测：

在山羊c-Myc基因的原核表达及多克隆抗体和单克隆抗体的制备的实验中需要羊抗c-Myc蛋白的多克隆抗体以便用于间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞。c-Myc是一种重要的原癌基因,它可以作为一种转录因子,在维持胚胎干细胞的生物学特性和诱导多性干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS)形成的过程中发挥重要的作用。因此制备其相应的多克隆抗体和单克隆抗体非常必要,实验采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,应用有限稀释法对其进行3-4次亚克隆,获得稳定分泌抗c-Myc蛋白抗体的杂交瘤细胞株。

参考文献

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[6]An Extended Transcriptional Network for Pluripotency of Embryonic Stem Cells[J].Jonghwan Kim,Jianlin Chu,Xiaohua Shen,Jianlong Wang,Stuart H.Orkin.Cell.2008(6)

[7]Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors[J].Kazutoshi Takahashi,Koji Tanabe,Mari Ohnuki,Megumi Narita,Tomoko Ichisaka,Kiichiro Tomoda,Shinya Yamanaka.Cell.2007(5)

[8]张昀.山羊c-Myc基因的原核表达及多克隆抗体和单克隆抗体的制备[D].广西大学,2012.