8305C（人甲状腺癌细胞）的应用

背景^[1-3]

8305C（人甲状腺癌细胞）是一种人甲状腺癌细胞系，常被用于生物医学研究，特别是甲状腺癌的发病机制、药物筛选和治疗方法研究等领域。这种细胞系来源于一名甲状腺癌患者的肿瘤样本，并在实验室中经过连续传代培养得到。

8305C（人甲状腺癌细胞）具有贴壁生长的特性，形态上通常呈现为上皮样细胞。在细胞培养中，需要使用含有适当比例的胎牛血清（FBS）和抗生素的培养基来维持其生长。细胞传代时，通常使用胰蛋白酶或胰酶-EDTA溶液进行消化，并按照适当的比例进行传代。

由于8305C（人甲状腺癌细胞）来源于甲状腺癌，因此它们具有甲状腺癌细胞的典型特征，如能够表达甲状腺癌相关的基因和蛋白质。这使得8305C（人甲状腺癌细胞）成为研究甲状腺癌发病机制的理想模型。科学家们可以利用这种细胞系研究甲状腺癌的发生、发展和转移机制，以及评估不同治疗策略对甲状腺癌细胞的疗效。

除了常规的细胞培养实验外，8305C（人甲状腺癌细胞）还可以用于基因表达分析、信号通路研究、药物敏感性测试等。这些研究有助于科学家们更深入地了解甲状腺癌的发病机制，发现新的治疗靶点，以及评估不同治疗策略对甲状腺癌患者的疗效。

需要注意的是，8305C（人甲状腺癌细胞）是一种肿瘤细胞系，因此在实验过程中需要遵守相关的生物安全规定和操作规程。同时，对于实验结果的分析和解读，也需要结合具体的研究背景和目的进行综合考虑。

8305C（人甲状腺癌细胞）

8305C（人甲状腺癌细胞）培养操作

1)复苏8305C（人甲状腺癌细胞）：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)8305C（人甲状腺癌细胞）传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)8305C（人甲状腺癌细胞）冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

8305C（人甲状腺癌细胞）可以用于GATAD2A基因沉默对甲状腺癌细胞增殖、周期及凋亡影响的研究

分析GATAD2A基因沉默对人甲状腺癌细胞株Cal-62、8305C（人甲状腺癌细胞）的增殖、周期及细胞凋亡的影响,从而为甲状腺肿瘤的临床诊断、治疗、预后判断提供参考,为甲状腺癌基因诊断及治疗提供新的靶点。

方法1.构建慢病毒载体sh GATAD2A,转染293T细胞,并行转染率检测及病毒滴度测定;2.用RNAi慢病毒颗粒分别转染人甲状腺癌细胞Cal-62和8305C（人甲状腺癌细胞）细胞株,筛选后,应用RT-PCR、Western Blot及斑点印迹法分别在m RNA和蛋白水平检测基因GATAD2A的干扰效果。

3. 通过四唑盐(MTT)比色法和流式细胞仪来分别检测sh GATAD2A(S1,S2)及sh Con干扰GATAD2A后8305C（人甲状腺癌细胞）增殖及细胞周期情况。

4. 采用流式细胞仪分析技术及caspases-3蛋白、PARP检测法检测GATAD2A沉默后8305C（人甲状腺癌细胞）的凋亡情况。

5. 统计学方法:所有实验重复3次.统计结果采用软件SPSS 17.0行t检验或单因素方差分析,P<0.05具有统计学意义。

结果1.成功构建三个重组质粒,分别为sh Con(通用阴性对照质粒),sh GATAD2A(S1)和sh GATAD2A(S2),三质粒系统共转染293T细胞,测得的转染率>90%,转染后产生的慢病毒颗粒滴度检测分别为:sh Con:7.0E+06 Tu/ml;sh GATAD2A(S1):4.0E+06Tu/ml;sh GATAD2A(S2):7.0E+06 Tu/ml。

2. RNAi慢病毒颗粒成功转染至8305C（人甲状腺癌细胞）中,转染效率达到80%以上。检测结果显示sh GATAD2A(S1,S2)转染的甲状腺癌细胞在m RNA及蛋白质水平明显低于阴性对照组。

3. GATAD2A基因沉默后8305C（人甲状腺癌细胞）的生长速度明显低于阴性对照;G0/G1期细胞比例明显减少,而G2/M期细胞比例明显增加。

4. GATAD2A基因沉默后8305C（人甲状腺癌细胞）凋亡指数明显高于对照组;凋亡相关蛋白caspases-3及衍生物PARP含量明显高于对照组。

结论1.成功构建及包装RNAi慢病毒载体,获得高滴度的RNAi慢病毒颗粒。2.包装后的RNAi慢病毒颗粒成功转染8305C（人甲状腺癌细胞）,并且有效的抑制了GATAD2A基因的表达。3.RNA干扰沉默GATAD2A基因的表达可明显抑制8305C（人甲状腺癌细胞）的增殖,并且使8305C（人甲状腺癌细胞）周期阻滞。

4.RNA干扰沉默GATAD2A基因表达可以促进8305C（人甲状腺癌细胞）的凋亡。

参考文献

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