HCT 116(人结肠癌细胞)的应用

背景^[1-3]

HCT 116(人结肠癌细胞)是一种人结肠癌细胞系，也被称为COL001或CCL-247。它是由美国国立癌症研究所(NCI)的科学家从一名51岁男性结肠癌患者的淋巴结中分离出来的。

HCT 116(人结肠癌细胞)具有许多特性，包括生长迅速、多态性、克隆形成能力和耐药性。这些特性使得它成为研究结肠癌发病机制、转移和治疗的重要工具。

HCT 116(人结肠癌细胞)在研究中被广泛应用，包括：

研究结肠癌的生物学特性：HCT 116(人结肠癌细胞)可以用于研究结肠癌细胞的生长、分化、凋亡和迁移等生物学特性。

研究转移：HCT 116(人结肠癌细胞)具有转移能力，可以用于研究结肠癌的转移机制和评估药物对转移的抑制作用。

药物筛选：HCT 116(人结肠癌细胞)常用于药物筛选，以评估抗癌药物或其他治疗方法对结肠癌的疗效。

研究信号通路：HCT 116(人结肠癌细胞)可以用于研究结肠癌相关的信号通路，如Wnt/β-连环蛋白通路、PI3K/Akt通路等。

需要注意的是，虽然HCT 116(人结肠癌细胞)在结肠癌研究中被广泛使用，但其特性可能与不同个体或肿瘤类型的结肠癌有所不同。因此，在具体实验中，还需要结合其他结肠癌细胞系和临床样本进行综合分析和评估。

HCT 116(人结肠癌细胞)

HCT 116(人结肠癌细胞)培养操作

1)复苏HCT 116(人结肠癌细胞)：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)HCT 116(人结肠癌细胞)传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)HCT 116(人结肠癌细胞)冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

HCT 116(人结肠癌细胞)可以用于健脾消癌方配方颗粒及传统汤剂对结肠癌细胞HCT116作用的比较研究

比较健脾消癌方配方颗粒与传统汤剂对HCT 116(人结肠癌细胞)的增殖与凋亡的作用,以指导临床用药及为科研剂型选择提供依据。

方法:1:用0.625ug/μL、1.25ug/μL、2.5ug/μL、5ug/μL健脾消癌方配方颗粒及0.625ug/μL、1.25ug/μL、2.5ug/μL、5ug/μL健脾消癌方传统汤剂处理HCT 116(人结肠癌细胞)各作用24h、48h,进行细胞增殖毒性实验(Cell Counting Kit-8法)检测健脾消癌方配方颗粒与传统汤剂对HCT 116(人结肠癌细胞)的抑制作用,并进行对比。

2:用1.25ug/μL、2.5ug/μL健脾消癌方配方颗粒及1.25ug/μL、2.5ug/μL健脾消癌方传统汤剂处理HCT 116(人结肠癌细胞),使用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bax,Bcl-x L,Caspase-3蛋白表达量。

结果:1.健脾消癌方配方颗粒和传统汤剂作用后,均随着药物浓度升高而抑制率升高,出现浓度依赖性;作用24h、48h时,传统汤剂均在1.25ug/μL及2.5ug/μL两个浓度抑制率优于配方颗粒,P<0.05;配方颗粒剂型在2.5ug/μL及5.0ug/μL时,48小时作用效果显著优于24h作用效果;传统汤剂剂型在0.625ug/μL、1.25ug/μL及2.5ug/μL浓度出现48h作用下HCT 116(人结肠癌细胞)抑制率高于24h抑制率,P<0.05呈现较为明显的时间依赖性。

2. 健脾消癌方传统汤剂1.25ug/μL及2.5ug/μL组HCT 116(人结肠癌细胞)均上调Bax蛋白表达,P<0.05。

3. 配方颗粒2.5ug/μL组和传统汤剂1.25ug/μL及2.5ug/μL组HCT 116(人结肠癌细胞)均下调Bcl-x L蛋白表达,P<0.05;传统汤剂2.5ug/μL组较配方颗粒2.5ug/μL组下调明显,差异具有统计学意义(P<0.001);传统汤剂2.5ug/μL组优于传统汤剂1.25ug/μL,存在统计学意义(P<0.05)。

4. 健脾消癌方配方颗粒与传统汤剂各浓度有不同程度的Caspase-3蛋白表达下降,其中配方颗粒2.5ug/μL组、传统汤剂1.25ug/μL及2.5ug/μL组HCT 116(人结肠癌细胞)均较对照组下调,差异具有统计学意义(P<0.001);1.25ug/μL及2.5ug/μL浓度下,传统汤剂均较同等浓度配方颗粒组蛋白表达明显下降(P<0.001)。

结论:1.配方颗粒剂型与传统汤剂剂型健脾消癌方均能对HCT 116(人结肠癌细胞)起到生长抑制作用,且呈浓度和时间依赖性,其中传统汤剂的抑制生长效果在1.25ug/μL及2.5ug/μL浓度条件下较配方颗粒组显著。

2.健脾消癌方能够上调HCT 116(人结肠癌细胞)Bax及下调Bcl-xl、Caspase-3。尤其传统汤剂干预效果显著,健脾消癌方干预HCT116细胞的凋亡相关蛋白表达从而影响细胞凋亡过程。

3.体外实验的数据结果表明,传统汤剂剂型健脾消癌方在抑制HCT 116(人结肠癌细胞)生长及促进凋亡方面效果优于配方颗粒,差异具有统计学意义。

参考文献

[1]Efficacy and Safety of Chinese Herbal Formula Granules in Treating Chronic Kidney Disease Stage 3:A Multicenter,Randomized,Placebo-Controlled,Double-Blind Clinical Trial.[J].Zhao Jing;Sun Wei;Chen Jihong;Sun Zhuxing;Chen Dai;Cao Chunhua;Yang Min;Ma Jipei;Wang Ling;Xing Changying;Chen Yan;Sheng Meixiao;Zhou Enchao;Xu Lingdong;Gao Kun;Liu Lihua;Liu Qiong;Yi Lan;He Weiming;Zhu Yuanyuan.Evidence-based complementary and alternative medicine:eCAM,2020

[2]Efficacy and safety of TCM combined with chemotherapy for SCLC:a systematic review and meta-analysis.[J].Chen Shuntai;Bao Yanju;Xu Jing;Zhang Xiwen;He Shulin;Zhang Zhenhua;Qi Runzhi;Jiang Juling;Liu Rui;Guo Qiujun;Zhang Xing;Xi Yupeng;Zheng Honggang;Hua Baojin.Journal of cancer research and clinical oncology,2020

[3]Traditional Chinese Medicine in Oncotherapy:The Research Status.[J].Tang Huijuan;;Shu Peng;;Liu Shenlin;;Zhang Xu;;Mattioli-Belmonte Monica.Nutrition and cancer,2020

[4]Cancer statistics,2020.[J].Siegel Rebecca L;;Miller Kimberly D;;Jemal Ahmedin.CA:a cancer journal for clinicians,2020

[5]张晓维.健脾消癌方配方颗粒及传统汤剂对结肠癌细胞HCT116作用的比较研究[D].湖南中医药大学,2023.