Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）的应用

背景^[1-3]

Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）是一种特殊类型的神经胶质细胞，它们的主要功能是支持、保护和营养神经元。这些细胞在周围神经系统中特别丰富，围绕着神经元的轴突形成髓鞘，从而帮助神经元进行快速、高效的信号传输。

在生物医学研究中，Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）被广泛用作实验模型，以研究神经系统的发育、损伤修复和神经退行性疾病等。它们可以模拟人体内的神经胶质细胞行为，帮助科学家们更好地理解神经系统的结构和功能。

为了保持Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）的生长和活性，它们需要在特定的培养基和条件下进行培养。这些条件可能包括适当的温度、湿度、二氧化碳浓度以及含有必要生长因子的培养基。同时，细胞的传代和冻存也需要遵循一定的操作规程，以确保细胞的稳定性和可靠性。

值得注意的是，Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）可以用于科研实验，但并不能用于临床诊断和治疗。此外，在使用这些细胞进行实验时，需要遵守相关的生物安全规定和操作规程，确保实验人员的安全。

Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）

Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）培养操作

1)复苏Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）可以用于高糖情况下胰岛素样生长因子-1通过neuritin抑制大鼠雪旺细胞凋亡的机制

1、观察在不同糖浓度培养下Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）中胰岛素样生长因子-1(insulin 1ike growth factor-1,IGF-1)的表达情况,以了解IGF-1对Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）的作用方式。2、观察IGF-1是否具有改善高糖下Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）凋亡的作用,是否通过影响neuritin的表达而发挥作用以及其作用机制。

方法:1、Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）中IGF-1的表达情况Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）贴壁培养后分别给予不同糖浓度(5.6、25、50、100、125、150 mM GS)处理48h。按不同浓度分为6组。实验每组n=3,重复3次。RT-QPCR检测IGF-1的表达情况。

2、IGF-1对高糖下Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）生存能力的影响不同浓度IGF-1干预高糖培养的Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）36h,实验分为五组:对照组(125mM GS)、干预组四组(IGF-1:0.1、1、10、100ng/ml+125mM GS)。实验每组n=3,重复3次,流式细胞仪检测凋亡情况、RT-QPCR和western blot检测Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）中neuritin的表达变化。

3、BAF干预neuritin基因沉默的Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）的生存情况50μg/mL BAF和/或10ng/ml IGF-1干预25mM GS培养下neuritin基因沉默Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）24h。实验分为A、B、C、D、E、F组分别对应空白对照组(Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）)、空载体组(未携带病毒的载体感染Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）)、基因沉默组(携带neuritin基因沉默慢病毒的载体感染Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）)、干预I组(IGF-1干预neuritin基因沉默Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）)、干预Ⅱ组(BAF干预neuritin基因沉默Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）)、干预Ⅲ组(BAF和IGF-1同步干预neuritin基因沉默Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）)。实验每组n=3,重复3次,流式检测细胞凋亡情况。

4、ly294002干预下Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）的生存情况10μg/mlly294002和/或10ng/mligf-1干预125mmgs培养下Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）或neuritin基因过表达Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）36h。实验分为a、b、c、d、e、f、g组分别对应对照组(125mmgs)、空载体组(125mmgs+未携带病毒的载体感染Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）)、基因过表达组(125mmgs+携带neuritin基因过表达慢病毒的载体感染Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）)、干预i组(igf-1干预高糖培养Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）)、干预Ⅱ组(ly294002和igf-1同步干预高糖培养Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）)、干预Ⅲ组(igf-1干预高糖培养neuritin基因过表达Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）)、干预Ⅳ组(ly294002和igf-1同步干预高糖培养neuritin基因过表达Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）)。实验每组n=3,重复3次,流式检测细胞凋亡情况。

结果:1、igf-1mrna在Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）中有表达,不同糖浓度组组间相比igf-1mrna的表达无统计学差异(p>0.05)。

2、igf-1对高糖培养scs生存能力的影响高糖培养下用不同浓度igf-1干预36h,10ng/ml和100ng/ml组细胞凋亡率下降、neuritin基因及蛋白的表达上升,且有统计学差异(p<0.05),但此两者间相比无统计学差异(p>0.05)。

3、baf干预对neuritin基因沉默Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）生存的影响干预i组细胞凋亡率上升、Ⅱ及Ⅲ组则下降。基因沉默组细胞凋亡率与干预Ⅱ及Ⅲ组相比均有统计学差异(p<0.05)、与干预i组相比无统计学差异(p>0.05),干预Ⅱ组与Ⅲ组相比较无统计学差异。表明igf-1不能改善neuritin低表达Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）的凋亡,而baf能改善neuritin低表达Rat Schwann Cells（大鼠雪旺细胞）的凋亡。

参考文献

[1]Electrical stimulation and testosterone differentially enhance expression of regeneration-associated genes[J].Nijee Sharma;;Sam J.Marzo;;Kathryn J.Jones;;Eileen M.Foecking.Experimental Neurology,2009(1)

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[5]晏玲飞.高糖情况下胰岛素样生长因子-1通过neuritin抑制大鼠雪旺细胞凋亡的机制[D].南京医科大学,2016.