微生物法测定利福霉素钠注射液含量

背景技术

利福霉素钠为半合成利福霉素类中的广谱抗菌药，对金黄色葡萄球菌，结核杆菌有较强的抗菌作用。因为抗生素分子结构、组分比较复杂，而采用抗生素微生物检定法的测定结果比较直观，所以微生物检定法仍是抗生素含量测定的首选方法。但是对于其方法学考究的文献报道仍较少，所以对其方法进行方法学考究有其必要性。因此，本文采用微生物法对利福霉素钠注射液的含量进行测定，并对其方法学进行考察，为微生物检定法的方法学建立及验证提供参考。

检测方法

1、标准曲线绘制

精密称定利福霉素钠对照品，用灭菌蒸馏水稀释至每毫升约含1000ul的溶液，再用灭菌的pH6.0的磷酸盐缓冲液稀释成0.1、0.25、0.5、1.0、1.2μ·mL^-1的浓度。取已制备的双碟10只，每2只为一个浓度，于每只双碟之4个不锈钢小管内滴加上述溶液。测定菌为藤黄微球菌〔MCC（B）28001〕，使用培养基Ⅱ（pH6.5~6.6），缓冲液为灭菌的pH6.0磷酸盐缓冲液，在35~37℃条件下培养16~18h。将所得的抑菌圈直径(Y)对利福霉素钠溶液浓度（C)的对数进行线性回归，得回归方程为Y=9.0113logC+20.884，r=0.9981(n=5)，在0.1u·mL^-1～1.2μ·mL^-1范围内抑菌圈直径与利福霉素钠浓度的对数值呈良好的线性关系。

2、空白辅料的干扰

按处方比例精密量取空白辅料液0.8mL，用灭菌蒸馏水稀释至50mL，再精密量取5mL，用灭菌的磷酸盐缓冲液稀释至50mL，得空白辅料溶液，所配空白溶液与含药溶液具有相同的辅料量。将空白辅料溶液按上述方法进行点样培养，未见有抑菌圈出现。实验结果表明，空白辅料对微生物法测定利福霉素含量不产生影响。

3、剂间比的验证

将利福霉素钠对照品制成高浓度1.0u·mL^-1和低浓度0.5μ·mL^-1（2：1），按项1方法进行试验。根据微生物检定法中双碟的制备所规定的高浓度所致的抑菌圈直径范围(18mm~22mm），高浓度所致的抑菌圈直径为20.23mm，高低浓度所致抑菌圈直径差为2.12mm。符合规定中高浓度所致的抑菌圈直径范围，且高低浓度所致抑菌圈直径大小可以区分。

4、回收率试验

将一定量的药物与辅料按处方比例，分别配成标示量为80%、100%、120%的利福霉素钠注射液，每批约100支，每个剂量取3份样品，按照微生物效价二剂量法测定，实验结果平均回收率为100.1%，RSD为0.87%(n=9)，符合微生物检定法的准确度要求。

5、精密度试验

取同一批号的利福霉素钠注射液，照1项下方法，进行6次含量测定，结果RSD为0.91%，表明本方法具有良好的重复性。

6、样品的含量测定

取利福霉素钠注射液样品，加灭菌水制成1000μ·mL^-1的利福霉素钠溶液，再用pH6.0磷酸盐灭菌缓冲液稀释成1.0μ·mL^-1和0.5μ·mL^-1的溶液。另取利福霉素钠标准品，同法配制。按抗生素生物二剂量法测定，可信限不得大于7%。结果显示可信限均小于7%。

参考文献

[1]陈颖,周丽梅,杨帆. 微生物法测定利福霉素钠注射液含量的方法学验证[J]. 海峡药学,2008,20(5):44-46. DOI:10.3969/j.issn.1006-3765.2008.05.024.