重组蛋白 A/G/L

背景^[1-7]

Recombinant Protein A/G/L（重组蛋白a/g/l）是微生物来源的天然或重组蛋白质，可以和哺乳动物的免疫球蛋白结合。将这些蛋白偶联于支持物上，利用亲和层析来纯化抗体，也可用于免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)或免疫共沉淀(Co-IP)。不同的抗体结合蛋白与不同的免疫球蛋白的结合能力并不一样，它们受到后者的来源及亚类的影响。

因此对于不同的抗体需要选择不同的抗体结合蛋白。将SPA、SPG和PPL的单结构域基因优化、人工合成，使其在大肠杆菌中实现可溶性融合串联表达，将优选出的重组蛋白纯化、标记，标记产物经Western blot、ELISA检测，可与多物哺乳动物免疫球蛋白结合，可作为哺乳动物血清学检测中的通用抗体，替代抗免疫球蛋白抗体运用到哺乳动物抗体检测方法中，并建立一种多物种通用口蹄疫检测方法。不但实现对牛、猪、羊、鹿口蹄疫感染进行通用检测，还为多种动物共患传染病的监测和防控提供方便、可靠的技术支持。

金黄色葡萄球菌蛋白A（Staphylococcal proteinA,SPA）、链球菌（C和G群）蛋白G（Streptococcal protein G,SPG）和大消化链球菌蛋白L（Peptostreptococcus protein L,PPL）是典型的免疫球蛋白结合蛋白。它们能结合大多数哺乳动物的免疫球蛋白，但结合方式和结合谱不同。三种蛋白可以优势互补，不仅有更好的结合能力，还具有更广的结合谱，有很好的应用前景。蛋白A、蛋白G、蛋白L都是免疫球蛋白结合分子，这类分子对哺乳动物Ig上的特殊位点表现出很强的亲和性。

尽管这些分子的精确功能还没有完全为人们所知，但它在细菌的致病性方面扮演着重要的角色。常见的细菌病原体金黄色葡萄球菌产生一个42KDa的毒力因子蛋白A（SPA），包含五个高度同源性的胞外Ig结合区域即E、D、A、B和C。链球菌蛋白G(SPG)包含两个到三个结合哺乳动物Ig恒定区Fc部位的结构域。与蛋白A和蛋白G不同，蛋白L(PPL)只结合哺乳动物κ型Ig轻链。

三种蛋白在结构和功能上有相似和不同之处，每种蛋白都不能单独和所有哺乳动物Ig结合。蛋白A，蛋白G，蛋白L的单个结构域已被证实有结合Ig的功能。Protein A/G/L Ig结合蛋白（SPA、SPG、PPL）可结合多种哺乳动物的Ig，据此原理已开发出商品化的可检测多物种的布鲁氏菌病ELISA。口蹄疫可感染多种有蹄类哺乳动物，并且现在也需要一种能够同时检测多种动物口蹄疫感染的通用ELISA方法。

应用^[8]

Recombinant Protein A/G/L用于口蹄疫鉴别诊断：

选取PPL B3结构域进行基因优化,与现有的AG串联基因形成不同拷贝数的AGL基因,连接到p ET-30a(+)原核表达载体中,构建pET-30a(+)-L、pET-30a(+)-AGL、p ET-30a(+)-[AGL]2、p ET-30a(+)-[AGL]3四种重组表达载体。经原核表达系统得到4种重组蛋白即L、AGL、[AGL]2、[AGL]3,均为可溶性表达。经Ni-NTA亲和层析纯化得到的四种蛋白L、AGL、[AGL]2、[AGL]3,其中[AGL]2重组蛋白表达量高而且纯化回收率高。

Western blot分析鉴定AGL、[AGL]2、[AGL]3蛋白均能与牛血清发生特异性反应。Westernblot和间接ELISA分析结果显示[AGL]2重组蛋白与可与9种哺乳动物Ig反应,而且结合能力强于[AG]3重组蛋白。对[AGL]2重组蛋白进行HRP标记(过碘酸钠法),经直接ELISA方法测定[AGL]2-HRP有很高的结合兔IgG活性。Dot-ELISA和间接ELISA结果显示[AGL]2酶标蛋白可结合9种哺乳动物Ig,而且[AGL]2酶标蛋白结合人Ig M和人Ig A能力强于[AG]4酶标蛋白。经验证,[AGL]2酶标蛋白可检测兔源免疫抗体;特异性检测牛、犬、鹿、猪、羊血清中的布鲁氏菌病抗体;特异性检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体

参考文献

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