RG108(DNA Methyltransferase抑制剂)

背景^[1-7]

RG108(DNA Methyltransferase抑制剂)是一种非核苷的DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase)抑制剂，IC50值为115 nM。RG108有效阻断体外人细胞系中DNA甲基转移酶，并且不会引起共价酶俘获。细胞用低微摩尔浓度的RG108培育，导致基因组DNA显著脱甲基化，而没有可检测的毒性。有趣的是，RG108引起肿瘤抑制基因脱甲基和再活化，但是它不影响着丝粒基因序列的甲基化。

在另一个研究中，进行生物素化RG108缀合物的合成和体外分析以评估与DNA甲基转移酶的相互作用。最近的研究表明，与天然SMs相比，RG108能够显著降低SM衍生的iPS细胞中DNA活性。此外,DNMT抑制剂RG108被用于体内动物实验以探讨甲基化在癫痫中的可能作用。

利用KA小鼠,采用RT-PCR检测基因水平,western blot检测蛋白的表达,免疫荧光检测蛋白表达部位,BSP技术测试启动子甲基化情况；侧脑室注射甲基化转移酶抑制剂后观察急性和慢性动物行为变化及基因和蛋白质表达的变化。

结果：RASGRF1表达逐渐下降并且在慢性期达到最低水平,它主要表达于神经元而不在神经胶质细胞。在KA诱导的小鼠癫痫(1天,10天,45天)的体内模型中,我们发现SE后10天海马5’区表现出高甲基化。RG108预处理后的小鼠中表现出明显降低癫痫易感性,减少发作的潜伏期,降低发作的严重程度；并且能显著降低自发性发作小鼠的百分比。RG108可以抑制由红藻氨酸诱导RASGRF1的高甲基化,并且可能逆转这种表达的下调。

应用^[8][9]

RG108(DNA Methyltransferase抑制剂)可用于研究肺腺癌A549细胞增殖、凋亡及RASSF1A基因表达的影响

DNA甲基转移酶抑制剂RG108对人肺腺癌细胞株A549增殖、凋亡以及对RASSF1A(Ras as-sociation domain proteinfamily1)基因启动子区域甲基化状态、表达的影响。用20μmol/L的RG108对A549细胞进行化学干预72h,用MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术检测细胞周期以及凋亡情况;RT-PCR观察RASSF1A基因mRNA水平变化;Western blot检测RASSF1A蛋白的表达;甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测RASSF1A基因启动子区域甲基化状态的改变。

结果经RG108干预72h后,A549细胞的抑制率为17.2±0.43%,细胞周期阻滞于G0/G1期,并引起细胞凋亡。RT-PCR和Western blot结果显示在干预组细胞中分别出现RASSF1A基因的DNA条带(329bp)和蛋白质条带(39kD),而对照组中无相应条带出现。RASSF1A基因启动子区域由甲基化状态转变为非甲基化状态。结论RG108可使RASSF1A基因启动子区域去甲基化,并通过该机制诱导RASSF1A基因在人肺腺癌细胞株A549中表达。

参考文献

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