RIN-14B 大鼠胰岛素瘤细胞系的应用

背景^[1-3]

RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系是一种来源于大鼠的胰岛素瘤细胞系，常用于研究胰岛素分泌、胰岛素抵抗、糖尿病等相关疾病。该细胞系具有以下特点：

1.来源：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系来源于大鼠的胰岛素瘤组织，经过多次传代和筛选，形成了一个相对稳定的细胞系。

2.形态特征：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系细胞呈多边形或长条形，大小约为15-30微米，胞质丰富，核大而圆，核仁明显。

3.生长特性：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系细胞生长迅速，传代周期约为24-48小时，可在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中稳定生长。

4.胰岛素分泌功能：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系细胞具有胰岛素分泌功能，可通过刺激剂如葡萄糖、精氨酸等诱导胰岛素分泌。

5.胰岛素抵抗特性：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系细胞具有胰岛素抵抗特性，可用作研究胰岛素抵抗相关疾病的模型。

6.基因表达特征：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系细胞具有典型的胰岛素瘤细胞基因表达特征，如Insulin、Glut2、Slc2a2、Slc2a4、Slc2a5、Slc2a8、Slc2a9、Slc2a10、Slc2a11、Slc2a12、Slc2a13、Slc2a14、Slc2a15、Slc2a16、Slc2a17、Slc2a18、Slc2a19、Slc2a20、Slc2a21、Slc2a22、Slc2a23、Slc2a24、Slc2a25、Slc2a26、Slc2a27、Slc2a28、Slc2a29、Slc2a30、Slc2a31、Slc2a32、Slc2a33、Slc2a34、Slc2a35、Slc2a36、Slc2a37、Slc2a38、Slc2a39、Slc2a40、Slc2a41、Slc2a42、Slc2a43、Slc2a44、Slc2a45、Slc2a46、Slc2a47、Slc2a48、Slc2a49、Slc2a50、Slc2a51、Slc2a52、Slc2a53、Slc2a54、Slc2a55、Slc2a56、Slc2a57、Slc2a58、Slc2a59、Slc2a60等基因的表达。

7. 其他特性：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系细胞还具有一定的增殖能力，可用作研究胰岛素瘤细胞增殖相关疾病的模型。

RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系

RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系培养操作

1)复苏RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系可以用于超极化激活环核苷酸门控的阳离子通道对RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系兴奋性的调控作用

RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系源自大鼠胰岛神经内分泌瘤,表达TPH2,能合成和分泌5-HT,被认为是一种良好的EC细胞模型。因此本研究采用膜片钳的方法研究HCN通道对RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系兴奋性的影响,并探讨炎症因子TNF-α刺激下RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系兴奋性的变化以及HCN通道在其中的作用,为阐明EC细胞的HCN2通道的生理和病理意义提供科学资料。

1. RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系电生理特征研究在电流钳模式下记录RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系,发现它们的静息膜电位介于-55-65mV(均值为-61.34mV),有趣的是,在未给予刺激的情况下,许多细胞的膜电位呈现出膜电位瞬变。在给予去极化电流刺激时,RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系可以发放动作电位,而且其中部分细胞可以发放连续的动作电位,这说明RIN-14B是一种可兴奋细胞,符合神经内分泌细胞的特征。电压依赖性钠通道阻断剂河豚毒素(TTX,0.1或1μM)可阻断动作电位的发放,而广谱的电压依赖性钙通道阻断剂CdCl2(200μM)对动作电位并没有影响,表明RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系的动作电位是由钠通道所介导发放的,这与文献报道的肠道EC细胞的兴奋性特征相一致。

2. RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系表达功能性的HCN通道在电压钳模式下记录RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系,发现在给以-10mV为阶梯从予-60mV到-120mV、时程600 ms的超极化电压刺激时,可以记录到电压依赖性的内向电流,而且这种电流可以被HCN通道的阻断剂ZD 7288(1030μM)所阻断。在电流钳模式下记录时,当给予细胞-140pA超极化电流刺激时,细胞的膜电位会有先超极化后去极化的袋状”sag”现象,这种超极化电流引起的膜电位sag可被ZD 7288所逆转。Ivabradine是一种用于治疗心动过速型心衰的小分子药物,其作用原理是阻断HCN通道介导的起搏电流。我们发现Ivabradine(10100μM)能浓度依赖性地逆转超极化电流刺激RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系所引起的膜电位“sag”现象。这些结果都提示RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系表达功能性的HCN通道。

3.HCN通道调控RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系的兴奋性在电流钳模式下记录RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系的静息膜电位,发现ZD 7288(30μM)或Ivabradine(30μM)都能使膜电位发生一定程度的超极化,表明HCN通道在RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系的静息状态会激活,这些激活的HCN通道使得细胞的膜电位发生了去极化,提高细胞兴奋性。随后我们发现RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系在超极化刺激结束时形成反跳去极化,部分细胞反跳去极化会伴随动作电位。反跳去极化是细胞对超极化刺激的一种反馈补偿机制,也是细胞兴奋性的一种特征。当我们给HCN通道的阻断剂ZD 7288或者Ivabradine时均使得,发现反跳去极化会有明显的一个延迟发放,主要体现在反跳去极化的潜伏期加长,幅度减弱,。而部分发放动作电位的反跳去极化基础上的在给HCN通道的阻断剂后动作电位也会消失,。事实上HCN通道的阻断剂本身并不影响钠通道,这些结果进一步提示HCN通道参与RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞系兴奋性的调控。

参考文献

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