高效液相色谱法测定左羟丙哌嗪中右羟丙哌嗪的含量

背景技术

羟丙哌嗪为新一代外周镇咳药，主要作用于呼吸道中的C纤维细胞而抑制咳嗽反射，本品作为手性药物，存在左旋异构体与右旋异构体2种光学结构，曾以消旋体形式给药，但有明显的中枢镇静副作用，且有一定的药物依赖性。药理研究表明该副作用来源于右羟丙哌嗪，故以羟丙哌嗪的单一左旋体给药更为科学、合理。左羟丙哌嗪由于镇咳效果明显、不良反应少、无药物依赖性且耐受性好，在临床得到广泛应用，但其在生产的过程中可能会有对映体产生，为更好控制左羟丙哌嗪的光学纯度，降低其中枢镇静副作用，除对产品中左羟丙哌嗪的含量进行控制外，还需对产品中的右羟丙哌嗪进行控制。目前已有多篇文献报道对左羟丙哌嗪含量、有关物质进行测定，但未见对右羟丙哌嗪进行控制的报道，为有效控制产品的质量，根据右羟丙哌嗪的结构特点，本文建立了HPLC测定其含量的方法。

检测方法

1、液相色谱条件

色谱柱为CHIRALPAK AD-H(5μm,250×4.6mm)。流动相为正已烷-无水乙醇-二乙胺（80：20：0.2）。检测波长设为250nm。流速设为1.0mL/min。进样量设为20μL。

2、对照品溶液的制备

取右羟丙哌嗪对照品适量，精密称量，用正已烷-无水乙醇（60：40）制成每1ml约含2.5μg的溶液，作为对照品溶液。

3、样品处理

取本品10瓶，用二氯甲烷100ml萃取三次，合并二氯甲烷层，水浴蒸干，加入丙酮适量使溶解，浓缩，析晶，取结晶适量，加正已烷-无水乙醇（60：40）制成每lml约含左羟丙哌嗪0.5mg的溶液，作为供试品溶液。

4、线性关系考察

准确称取右羟丙哌嗪对照品约10mg，加正已烷-无水乙醇（60:40）溶解并定容至100ml。此溶液每1ml约含100μg右羟丙哌嗪，作为对照品储备液。分别精密量取对照品储备液各适量，用正已烷-无水乙醇（60：40）稀释制成浓度分别约为0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、50.0μg/ml的右羟丙哌嗪对照品溶液，按上述液相色谱条件，分别精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图峰面积。结果在 0.512μg/ml～51.20μg/ml 浓度范围内右羟丙哌嗪具有良好的线性。

5、精密度试验

取右羟丙哌嗪对照品溶液（上述浓度 2.048μg/ml）20μl 注入液相色谱仪，记录色谱图峰面积，重复测定6次，结果精密度试验测定峰面积的相对标准偏差小于2%，本方法具有良好的精密度。

6、重现性实验

采用上述含量测定方法，在不同实验室由不同分析人员、使用不同色谱柱、不同仪器，对相同样品进行测定重现性试验含量测定结果相对标准偏差小于2%，本方法具有较好的重现性。

7、回收率试验

精密称取右羟丙哌嗪对照品约12.5mg，置50ml量瓶中，精密量取5ml置100ml量瓶中，用正已烷-无水乙醇（60：40）溶解并加至刻度，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液2.0ml、2.5ml、3.0ml各3份，分别置50ml量瓶中，挥干后，用样品溶液稀释至刻度，摇匀，作为低、中、高浓度供试品溶液；取右羟丙哌嗪对照品适量，精密称定，加正已烷-无水乙醇（60:40）溶解并稀释制成每1ml中约含2.5μg的溶液，作为对照品溶液；按上述液相色谱条件，分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图峰面积，按外标法以色谱图峰面积计算回收率。结果表明，右羟丙哌嗪的回收率在98%~102%之间，各浓度下的平均回收率均在98%~102%之间，回收率的相对标准偏差小于2%，该方法误差在允许的范围内，测定结果比较准确。

参考文献

[1]张巍. HPLC法测定左羟丙哌嗪口服溶液中右羟丙哌嗪的含量[J]. 科学技术创新,2019(27):62-63. DOI:10.3969/j.issn.1673-1328.2019.27.033.