小鼠晶状体上皮细胞的应用

背景^[1-3]

小鼠晶状体上皮细胞是晶状体中最重要的细胞类型之一，主要负责晶状体的生长、分化和代谢。晶状体是眼睛中的一种透明结构，位于虹膜和视网膜之间，负责将光线聚焦到视网膜上，从而形成清晰的视觉图像。

小鼠晶状体上皮细胞具有以下特点：

高度分化：小鼠晶状体上皮细胞在发育过程中会经历多次有丝分裂和分化，最终形成成熟的晶状体细胞。这些细胞具有高度分化的特性，包括特定的形态结构和功能。

透明度：小鼠晶状体上皮细胞具有高度透明的特性，这使得晶状体能够透过光线，保持眼睛的透明度。

代谢活跃：小鼠晶状体上皮细胞具有较高的代谢活性，需要不断地合成和分解蛋白质、脂肪和糖类等物质，以维持晶状体的正常功能。

易受损伤：由于小鼠晶状体上皮细胞的高度分化和代谢活跃，它们对外界环境和内部因素的变化非常敏感。例如，紫外线、氧化应激、营养不良等因素都可能导致小鼠晶状体上皮细胞的损伤和死亡。

参与白内障的发生：小鼠晶状体上皮细胞在白内障的发生中起着重要作用。白内障是一种常见的眼病，主要表现为晶状体的混浊和视力下降。研究表明，小鼠晶状体上皮细胞的损伤和死亡是导致白内障发生的重要原因之一。

小鼠晶状体上皮细胞

小鼠晶状体上皮细胞培养操作

1)复苏小鼠晶状体上皮细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)小鼠晶状体上皮细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)小鼠晶状体上皮细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

小鼠晶状体上皮细胞可以用于小鼠眼球发育及神经酰胺作用机制的研究

探讨角膜细胞的增殖与凋亡对角膜结构修复与塑形的作用；探讨晶状体细胞增殖对晶状体发生的作用及其与细胞周期之间的关系，研究Synaptophysin蛋白在晶状体发生过程中的作用；探讨视网膜细胞增殖与细胞周期之间的关系，以及视网膜神经细胞分化和突触连接形成对感光信息传递的作用；探讨神经酰胺堆积对视网膜发育的影响。

方法：应用HE染色、免疫荧光和BrdU技术等技术对胚胎和出生后小鼠角膜、小鼠晶状体上皮细胞、视网膜进行形态学观察，对视网膜BrdU和CyclinD1阳性细胞密度进行测量。

结果：1.小鼠角膜的发生与细胞凋亡胚胎发育及出生后早期，角膜以实质层的发育为主。P14左右，角膜上皮细胞层开始增殖分化为两层细胞，同时内皮细胞也开始分化。至P30时，可以辨别出角膜的六层结构。BrdU阳性细胞主要存在实质层中成纤维细胞，出生以后也可见于角膜上皮细胞层和内皮细胞层。随着角膜发育，P10左右，其它层的BrdU阳性细胞都消失，仅存在于角膜上皮细胞层。PCNA阳性细胞在发育早期散在分布在角膜的各层，P14以后PCNA阳性细胞均匀的分布在角膜上皮细胞的基底层，并维持在稳定状态。在角膜发育早期，在各层可见许多细胞凋亡。

2.小鼠晶状体上皮细胞发育过程中细胞增殖及Synaptophysin蛋白的表达E8左右，晶状体由最初的晶状体板分化而来，是由单层柱状上皮细胞围成的空泡，空泡再进一步分化，被原始晶状体纤维所替代，逐渐形成晶状体；BrdU和PCNA的阳性细胞主要分布在晶状体上皮细胞的前囊中央区，但P10以后BrdU阳性细胞已不在小鼠晶状体上皮细胞分布，而PCNA持续表达。Cyclin D1阳性细胞在胚胎期主要在晶状体上皮细胞的赤道部表达，出生早期在晶状体上皮细胞的前囊中央区，P5以后在赤道前区分布，赤道部有少量阳性细胞；在小鼠晶状体上皮细胞发育过程中，Synaptophysin可以在晶状体的基质中和赤道部的胞体中发现。

参考文献

[1]Calcineurin and Electrical Remodeling in Pathologic Cardiac Hypertrophy[J].Hui-Bin Liu;;Bao-Feng Yang;;De-Li Dong.Trends in Cardiovascular Medicine,2010(5)

[2]Proliferative and cell fate effects of Hedgehog signaling in the vertebrate retina[J].Valerie A.Wallace.Brain Research,2007

[3]Sonic hedgehog promotes stem-cell potential of Müller glia in the mammalian retina[J].Jin Wan;;Hua Zheng;;Hong-Lei Xiao;;Zhen-Jue She;;Guo-Min Zhou.Biochemical and Biophysical Research Communications,2007(2)

[4]A General Role of Hedgehog in the Regulation of Proliferation[J].Michalis Agathocleous;;Morgane Locker;;William A.Harris;;Muriel Perron.Cell Cycle,2007(2)

[5]李雪.小鼠眼球发育及神经酰胺作用机制的研究[D].河南大学,2014.