幼禽螺杆菌PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

幼禽螺杆菌PCR试剂盒是一种用于检测幼禽螺杆菌的PCR(聚合酶链式反应)试剂盒。幼禽螺杆菌是一种常见的家禽肠道病原菌，可以引起禽类腹泻、生长迟缓和生产性能下降等问题。

幼禽螺杆菌PCR试剂盒采用PCR技术，通过扩增幼禽螺杆菌的特异性DNA片段，从而实现对幼禽螺杆菌的快速、准确检测。使用时，只需将样品加入到试剂盒中，经过一定的反应时间和温度循环后，即可得到检测结果。

幼禽螺杆菌PCR试剂盒具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，适用于家禽养殖场、兽医实验室等场所对幼禽螺杆菌进行快速检测和诊断。

幼禽螺杆菌PCR试剂盒

幼禽螺杆菌PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据幼禽螺杆菌PCR试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在幼禽螺杆菌的感染。

应用^[4][5]

幼禽螺杆菌PCR试剂盒可以用于肝螺杆菌对肝癌细胞侵袭能力的影响及分子机制的初步研究

肝螺杆菌作为肠肝螺杆菌中的一员,属于与肝脏疾病有明确关系的五种肝螺杆菌(幼禽螺杆菌、肝螺杆菌、胆汁螺杆菌、胆囊螺杆菌、犬螺杆菌)之一。

利用幼禽螺杆菌PCR-PCR、DNA序列分析、免疫组化证实了人肝癌组织中确实存在螺杆菌感染,这充分说明螺杆菌能够在人类肝组织中生存。肝螺杆菌因其诱导引起的肝脏损害的病理特征与人类慢性肝病在许多方面相似,使肝螺杆菌感染相关疾病的研究成为研究的热点。以肝螺杆菌为研究因素,以人肝癌细胞株HEPG2和HCCLM3作为研究对象,采用Transwell侵袭实验、Western-blot、幼禽螺杆菌PCR-RealtimePCR及siRNA干扰方法分析肝螺杆菌活菌对肝癌细胞侵袭能力的影响以及其相关因子基因及蛋白水平表达差异,探讨其可能分子机制。

研究方法(1)肝螺杆菌对人肝癌细胞侵袭能力的影响：①分别以不同浓度的肝螺杆菌活菌作用于肝癌细胞HEPG2和HCCLM3,分为以下两组,实验组为不同浓度肝螺杆菌活菌(1×109CFU/ml、1×108CFU/ml、1×107CFU/ml、1x106CFU/ml)作用组,每组分别观察12h、24h、48h、72h；另以仅加入无肝螺杆菌空白液体培养基为对照组。②通过Transwell实验,检测各组细胞不同时间点侵袭细胞数量,以此观察浓度不同、时间不同情况下肝螺杆菌对肝癌细胞的侵袭能力的影响。并依此为根据,确定后续实验肝螺杆菌的最佳刺激浓度及刺激时间。

(2)肝螺杆菌诱导人肝癌细胞产生IL-8、TGF-β1、MMP-2和MMP-9的研究：①以第一部分确定的肝螺杆菌活菌最佳刺激浓度及最佳刺激时间,肝螺杆菌与肝癌细胞共孵育为实验组,无肝螺杆菌空白液体培养基为对照组。②利用ELISA方法,检测各组细胞所分泌的IL-8和TGF-β1的浓度变化。③采用Western Blot方法,检测各组细胞内MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平,④通过幼禽螺杆菌PCR-realtime PCR实验方法检测各组细胞IL-8、TGF-β1、MMP-2和MMP-9 mRNA的表达。(3)肝螺杆菌通过影响TLR4/MyD88信号通路增强人肝癌细胞侵袭能力：①用Western Blot检测各组细胞中TLR4、MyD88、TRIF蛋白的表达；②利用real time PCR在mRNA水平对各组细胞TLR4、MyD88、TRIF的表达进行验证；

参考文献

[1]Innate Immune Pattern Recognition:A Cell Biological Perspective[J].Sky W.Brubaker;;Kevin S.Bonham;;Ivan Zanoni;;Jonathan C.Kagan.Annual Review of Immunology,2015

[2]Innate Immune Recognition of Cancer[J].Seng-Ryong Woo;;Leticia Corrales;;Thomas F.Gajewski.Annual Review of Immunology,2015

[3]LPS promotes epithelial–mesenchymal transition and activation of TLR4/JNK signaling[J].Hangyu Li;;Yan Li;;Dan Liu;;Jingang Liu.Tumor Biology,2014(10)

[4]Elevated IL‐8,TNF‐α,and MCP‐1 in men with metastatic prostate cancer starting androgen‐deprivation therapy(ADT)are associated with shorter time to castration‐resistance and overall survival[J].Jaya Sharma;;Kathryn P.Gray;;Lauren C.Harshman;;Carolyn Evan;;Mari Nakabayashi;;Raina Fichorova;;Jennifer Rider;;Lorelei Mucci;;Philip W.Kantoff;;Christopher J.Sweeney.Prostate,2014(8)

[5]张春忙.肝螺杆菌对肝癌细胞侵袭能力的影响及分子机制的初步研究[D].南方医科大学,2016.