牛磺鹅去氧胆酸的制备

发布日期:2024/1/23 8:55:33

介绍

牛磺鹅去氧胆酸是酶法合成牛磺熊去氧胆酸的重要原料。胆汁酸(cholic acid)主要含有4种，分别为牛磺鹅去氧胆酸，牛磺胆酸，牛磺别胆酸和3α‑ 羟基‑7‑酮基胆烷酸。其中主要活性成分牛磺鹅去氧胆酸在家禽胆汁中的含量在 3‑4％之间[1]。

牛磺鹅去氧胆酸.jpg

牛磺鹅去氧胆酸

制备

以往制备方法的缺点

CN201210570131.4公开了一种鸡胆提取组合物及其提取方法，其中将牛磺鹅去氧胆酸与其他胆酸、氨基酸、蛋白质、脂肪等物质一起提取出。取鸡胆，冷冻，切碎，融化，压榨，过滤出胆汁，加入90‑98％的乙醇，室温搅拌，放置，沉淀蛋白，过滤，得上清液，加入石油醚进行萃取，收集乙醇层，浓缩蒸干，既得鸡胆提取组合物。提取过程虽然简单，但提取出的成分复杂，不能得到含量较高的的牛磺鹅去氧胆酸产品。

CN200610046652.4公开了一种用鸡胆提取鹅去氧胆酸的方法，取冻鸡胆切片，加热至70℃，加入所有胆汁总量10％氢氧化钠煮沸24小时，回流冷却，用盐酸调pH为2，得膏状物，用水洗至中性，加入胆膏2倍量的95％的乙醇和胆膏10％的硅藻土，回流后加入胆膏量10％的活性炭，回流，放冷后过滤，将滤液加入等量120#汽油脱脂，回流，静置，分离出的乙醇液并在反应釜中蒸干洗至中性，再加入2倍量95％的乙醇溶解后，加入蒸干药物量30％的氯化钡和蒸干药物量5％的活性炭，回流，热滤，将滤液浓缩出白色结晶物，洗净后加入10倍量水和10％倍量碳酸钠水溶液，加热回流，过滤，滤液调节至pH为2，将出现沉淀物干燥即得。该方法不仅步骤繁多，使用溶剂较多，成本高，收率低，且去掉牛磺酸的鹅去氧胆酸药效较差，后续通过化学法或者酶法合成熊去氧胆酸后，需要在体内经过酰胺化与牛磺酸结合后才能更有效的发挥生理作用。

取新鲜鸡胆汁500ml,加入3倍体积的乙醇提取，减压蒸干得鸡胆粉。将鸡胆粉用V(乙酸乙酯)：V(无水乙醇)＝8:2的混合液，以索氏提取器提取30次，冷却提取液得到浅黄色固体，过滤，沉淀用无水乙醇洗涤，置真空干燥器中干燥4h,用无水乙醇重结晶，得浅黄色TCDCANa结晶7.2g。文献采用薄层层析的方法报告TCDCANa含量在92％左右。该方法采用索氏抽提30次的方法，方法耗时长，操作复杂，损失较大，导致收率粗算只有50％左右，且产品含量低。

新制备方法

为了克服现有技术所存在的目标产物收率和纯度不理想等缺陷，赵士敏等人[2]提供一种从家禽胆汁中提取出高纯度，获得高收率的牛磺鹅去氧胆酸和牛磺胆酸的方法。具体步骤[2]如下：

步骤(1)：

取鸡胆汁1kg,用破碎机破碎后，用纯水提取2次，提取时间均为1h,料液比分别为5,3倍，过滤，合并滤液，共8850ml，经检测提取液中牛磺鹅去氧胆酸浓度为4.09mg/ml,牛磺胆酸的浓度为2.63mg/ml。

步骤(2)：

将提取液进行减压浓缩，得到浓缩液A，浓缩温度为65度，浓缩液A中牛磺鹅去氧胆酸的浓度为90.5mg/ml，牛磺胆酸的浓度为58.2mg/ml，浓缩液A的体积为400ml。

步骤(3)：

(3‑A)：将浓缩液A按照1:1的体积比加入乙酸乙酯400ml搅拌混合，然后用装有经修饰的超疏水海绵材料(上述记载的PU‑CNT‑PDA‑ODA)进行过滤 (水油分离)，除掉乙酸乙酯层，得到除掉绝大部分油溶性杂质的水层溶液,共萃取1次，弃乙酸乙酯层。

(3‑B)：将水层溶液调pH3.5,加入活性炭5g搅拌脱色1.5h，固液分离得到滤液，将滤液继续浓缩，得到浓缩液B,浓缩液B中牛磺鹅去氧胆酸的浓度为482.6mg/ml,牛磺胆酸的浓度为310.0mg/ml,浓缩液体积75ml。

步骤(4)：

对改性C18反相硅胶(市售商品SILICYCLE 50μm)用甲醇浸泡处理，脱气后装柱，装柱量2400g硅胶，采用5％的甲醇水溶液洗涤2个柱体积。将浓缩液B加入少量甲醇溶解后，通过改性反相硅胶柱层析进行分离，采用梯度甲醇水溶液进行洗脱，梯度设置为5％甲醇水溶液(1倍柱体积)，35％甲醇水溶液(3倍柱体积)，40％甲醇水溶液(10倍柱体积)，45％甲醇水溶液(7倍柱体积)，流速10ml/min。其中35％甲醇水溶液洗脱得到含有牛磺胆酸的洗

脱液A；40％甲醇水溶液、45％甲醇水溶液洗脱得到含有牛磺熊去氧胆酸的洗脱液B。将洗脱液A和洗脱液B分别浓缩干燥得到牛磺胆酸22.08g,含量98.2％，收率93.15％，牛磺鹅去氧胆酸35.05g,含量98.5％；收率95.38％。