嵌合IgG抗体构建的介绍

背景及概述^[1]

IgG抗体哺乳类动物抗体(又称免疫球蛋白，immunoglobulin，简称Ig)的种型之一。抵抗病原入侵的抗体相关免疫力，主要由该种型下的四种类型所提供，也是唯一一种可以穿过胎盘为胎儿提供被动免疫力的种型。IgG抗体在免疫应答中起着激活补体，中和多种毒素的作用。在临床实验室诊断中，有很多是通过检测机体产生的针对某种细菌或病毒IgM抗体和IgG抗体来确认其感染或曾经感染，比如弓形虫，巨细胞病毒(CMV)等。嵌合IgG抗体构建和表达分为以下几个步骤：

1）引物的设计与合成；

2）含有相应酶切位点的轻重链可变区基因的PCR扩增和纯化；

3）嵌合IgG抗体真核表达载体的构建的鉴定；具体步骤如下：分别以克隆载体pMD18－T/VH和pMD18－T/VL为模板，用设计的含有相应酶切位点和内含子剪切位点的特异引物扩增HAb8轻、重链可变区基因。克隆入真核表达载体pDHL后，酶切及测序鉴定阳性重组载体pDHL/chHAbls。之后转染SP2/0细胞，经MTX筛选获得抗性克隆。采用有限稀释法单克隆化PDHL/ChHAbl阳性转染的SP2/0细胞，并持续MTX加压培养。通过ELISA从单克隆细胞株中筛选高效表达的细胞株。表达产物利用proteinG亲合层析柱纯化后，进行SDS．PAGE电泳和Western七b检测，同时采用ELISA和免疫荧光法检测其抗原结合特异性。。

主要参考资料

[1] 抗人肝癌基因工程抗体嵌合IgG和嵌合Fab的构建和表达