节杆菌通用PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

节杆菌通用PCR试剂盒是一种用于检测节杆菌属的荧光定量PCR试剂盒。该试剂盒采用染料法荧光定量PCR技术，以节杆菌属高度保守的VP1区为靶标，设计特异性引物，实现对节杆菌属的快速、准确检测。

节杆菌通用PCR试剂盒具有高特异性、高灵敏度、操作简便和高通量等特点。与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增，检测灵敏度可达10~100拷贝。用户只需提供待测样本，加入引物即可进行PCR反应，具有广泛的用途。

该试剂盒可应用于感染性疾病的诊断，特别是对节杆菌属引起的感染进行快速检测和诊断。此外，节杆菌通用PCR试剂盒还可用于科研领域，如节杆菌属的分子生物学研究、流行病学调查等。

使用节杆菌通用PCR试剂盒时，需按照说明书进行操作，注意防止污染和交叉污染，保证检测结果的准确性和可靠性。同时，对于阳性结果，应结合临床表现和其他检查结果进行综合分析，以确定最终的诊断。

节杆菌通用PCR试剂盒

节杆菌通用PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据节杆菌通用PCR试剂盒的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在节杆菌的感染。

应用^[4-5]

节杆菌通用PCR试剂盒可以用于产纤维素酶细菌的分离鉴定及产酶条件的初步研究

通过从采集的富含植物腐败纤维的土壤以及郑州市某造纸厂废纸浆样本中,采用改良的筛选培养基和节杆菌通用PCR试剂盒分离并鉴定了具有高酶活力的纤维素酶产生菌,以期对纤维素酶的进一步工业化生产利用提供新的理论依据。

材料与方法材料来源:样品采自郑州大学校园内的富含植物腐败纤维的土壤以及郑州市某造纸厂废纸浆。筛选方法:以羧甲基纤维素钠为主要碳源,从采集的样品进行富集培养,采用纤维素刚果红选择培养基对富集培养物进行初筛,根据菌落周围透明圈的产生情况,获得一些具有产纤维素酶能力的菌株,测量不同培养条件下的相对酶活性,进一步利用平板划线法进行复筛,获得产纤维素酶能力较强的菌株。

鉴定方法:为确定分离菌株的分类学地位,节杆菌通用PCR试剂盒PCR扩增后测定其16S rDNA基因的部分序列,在GenBank中通过Blast进行同源性比较,并与一些相关细菌构建系统发育树,结合其形态特征和生理生化特征,对其进行分类学鉴定。摇瓶发酵:根据刚果红选择性培养基上测得的纤维素酶相对酶活情况,利用最优条件进行液体发酵,测量分离菌株羧甲基纤维素(CMC)酶活性。

结果①经过节杆菌通用PCR试剂盒初筛和复筛,从采集的样本中获得了2株产纤维素酶细菌菌株CP4和L1,其相对酶活较高。

②基于节杆菌通用PCR试剂盒16S rDNA序列的同源性比较及系统发育学研究表明:CP4分属于芽孢杆菌属;L1分属于节杆菌属。

参考文献

[1]Recent developments on cellulases and carbohydrate-binding modules with cellulose affinity[J].Lars Hildén;Gunnar Johansson.Biotechnology Letters,2004(22)

[2]Purification and characterization of a cellulase(CMCase)from a newly isolated thermophilic aerobic bacterium Caldibacillus cellulovorans gen.nov.,sp nov[J].Xiao Ping Huang;;Colin Monk.World Journal of Microbiology&Biotechnology,2004

[3]Studies on carboxymethyl cellulase produced by an alkalothermophilic actinomycete[J].Sudeep P.George;;Absar Ahmad;;Mala B.Rao.Bioresource Technology,2001(2)

[4]Alkaline cellulases from alkaliphilic Bacillus:Enzymatic properties,genetics,and application to detergents[J].Susumu Ito.Extremophiles,1997(2)

[5]郭大城.产纤维素酶细菌的分离鉴定及产酶条件的初步研究[D].郑州大学,2012.