箭毒蛙壶菌PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

箭毒蛙壶菌PCR试剂盒是一种用于检测箭毒蛙壶菌的分子生物学试剂盒。该试剂盒利用聚合酶链式反应（PCR）技术，能够快速、准确地检测出样本中是否存在箭毒蛙壶菌的DNA。

试剂盒中包含了一系列的引物和探针，这些引物和探针经过精心设计，能够特异性地与箭毒蛙壶菌的DNA序列结合，从而实现对目标DNA的扩增和检测。通过PCR技术，可以在短时间内将目标DNA扩增至上千倍，从而大大提高了检测的灵敏度和特异性。

箭毒蛙壶菌PCR试剂盒通常适用于科研和诊断领域，可以用于检测箭毒蛙壶菌感染的动物和植物样本，以及环境中的污染情况。该试剂盒具有快速、准确、灵敏度高等优点，能够为科研人员和诊断医生提供可靠的检测结果。

需要注意的是，在使用箭毒蛙壶菌PCR试剂盒进行实验时，应严格按照说明书中的操作步骤进行，以确保实验结果的准确性和可靠性。同时，还应注意避免交叉污染等问题的发生，以保证实验的安全性和有效性。

箭毒蛙壶菌PCR试剂盒

箭毒蛙壶菌PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据箭毒蛙壶菌PCR试剂盒的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在箭毒蛙壶菌的感染。

应用^[4-5]

箭毒蛙壶菌PCR试剂盒可以用于东北林蛙源迟缓爱德华氏菌分离、鉴定及其灭活疫苗的制备

对荆州市太湖发病的养殖东北林蛙开展蛙壶菌(Batrachochytrium dendrobatidis)、蛙病毒、寄生虫和细菌的病原检测,并从患病蛙肝脏、脾脏和肾脏中分离到一株优势菌,经生理生化和分子生物学鉴定,确定该菌为迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)。

研究了分离获得的迟缓爱德华氏菌对东北林蛙的致病性,同时对该菌进行了全基因组测序分析,并制备了该菌的灭活疫苗,测定健康蛙免疫后在不同时间段的抗氧化酶活力和免疫基因的表达情况,最后测定其免疫保护效果。

主要结果如下:1.东北林蛙暴发性疾病病原分离及鉴定。2021年7月,荆州市太湖一养殖场发生东北林蛙大规模发病死亡现象,病蛙出现活动力下降、厌食、腹水、腹泻便血、皮肤红肿出血等临床症状。经镜检、箭毒蛙壶菌PCR试剂盒分子检测均未发现寄生虫、蛙壶菌和蛙病毒感染,但从病蛙肝、脾、肾中分离到一株优势菌,并将其命名为RKb1。

该优势菌经革兰氏染色观察为革兰氏阴性杆菌,通过生理生化、箭毒蛙壶菌PCR试剂盒16S r RNA和gyr B鉴定为迟缓爱德华氏菌。通过浸泡和注射两种方式进行回归感染试验,发现人工感染病蛙与自然患病蛙出现相同的临床症状,确定该菌为东北林蛙该起疾病的致病菌,经计算RKb1注射组与浸泡组半致死数LD50分别为1.9×103CFU/g和6.7×103CFU/g。组织病理分析结果表明该菌会导致患病蛙肝脏窦周间隙溶解呈网状空泡化,肝细胞崩解,并有肉芽肿的产生;脾脏细胞萎缩,炎性细胞浸润并有肉芽肿产生;肾脏出现致密斑萎缩,肾小球变性崩解,肾小囊腔玻璃样变性;肠壁肌层纤维溶解,浆膜损伤,肠绒毛脱落。

参考文献

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[3]Multiplex PCR assay for correct identification of the fish pathogenic species of Edwardsiella genus reveals the presence of E.anguillarum in South America in strains previously characterized as E.tarda.[J].da Costa Arthur Roberto;Chideroli Roberta Torres;Lanes Gabriel Chagas;Ferrari Natália Amoroso;Chicoski Larissa Melo;Batista Catiane Estefani;Pandolfi Victor César Freitas;Ware Cynthia;Griffin Matt J;Dos Santos Anderson Rodrigues;de Carvalho Azevedo Vasco Ariston;da Costa Mateus Matiuzzi;de Pádua Pereira Ulisses.Journal of applied microbiology,2022

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[5]李川北.东北林蛙源迟缓爱德华氏菌分离、鉴定及其灭活疫苗的制备[D].长江大学,2023.