急性非淋巴白血病细胞的应用

背景^[1-3]

急性非淋巴白血病细胞是指急性非淋巴细胞白血病（Acute non-lymphocytic leukemia，ANLL）的异常造血细胞。

急性非淋巴白血病细胞可以发生于任何年龄，男女之间无差异，无明显年龄的发病高峰。这些异常细胞主要来源于骨髓中的造血干细胞，可以在血液中大量增殖，影响正常的造血功能，导致贫血、出血、感染等症状。

目前对于急性非淋巴白血病细胞的发病原因尚未完全明了，但已经发现一些因素可能与该病的发生有关。例如病毒、遗传因素、化学物质、放射线等。

急性非淋巴白血病的治疗方法包括化疗、放疗、骨髓移植等。治疗的目的在于控制病情，减轻症状，提高生活质量。同时，患者需要保持良好的心态，积极配合治疗，以获得最佳的治疗效果。

急性非淋巴白血病细胞

急性非淋巴白血病细胞培养操作

1)复苏急性非淋巴白血病细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)急性非淋巴白血病细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)急性非淋巴白血病细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

急性非淋巴白血病细胞可以用于沙利度胺联合三氧化二砷对急性非淋巴细胞白血病VEGF表达的影响及凋亡作用的研究

应用白血病细胞体外培养方法观察不同浓度的沙利度胺和As2O3对急性非淋巴细胞白血病(ANLL)细胞分泌VEGF及细胞凋亡的影响，观察二者在抗急性白血病方面的协同性。

实验材料1．急性非淋巴白血病细胞2．器材：细胞恒温培养箱、台式高速离心机、超净工作台、超低温冰箱、相差显微镜、电热恒温干燥箱、酶标仪、流式细胞仪3．药品：沙利度胺、As2O3 4．其他试剂：急性非淋巴白血病细胞培养液、VEGF试剂盒、流式测凋亡相关试剂。

实验方法1.急性非淋巴白血病细胞分离与培养无菌条件下采集骨髓液2祖(sooU肝素抗凝)，用Ficoll淋巴细胞分离液分离单个核细胞(MNC)，洗涤3次，培养于含10%胎牛血清(FBS)、looIU/血青霉素、looIU/血链霉素的RPMll640培养液中，置于37℃、5%C02饱和湿度的培养箱中传代培养。

2. 实验分组取急性非淋巴白血病细胞对数生长期细胞，离心去上清，重新加人培养液，以2 x 106/d的细胞浓度加人24孔培养板，分6个实验组，A组:空白对照组;B组:loou酬祖沙利度胺;C组:300u岁d沙利度胺;D组:25urnoF认s:03;E组:loou岁d沙利度胺和25umoF认s:03;F组:300ug/zul沙利度胺和25umoF认5203。置于37℃、5%COZ饱和湿度的培养箱中连续培养72小时。

3. 检测急性非淋巴白血病细胞VEGF与凋亡收集细胞悬液离心5分钟，细胞行碘化丙咙(PI)染色用流式细胞仪检测凋亡;用EUSA法检测上清液的VEGF浓度。同时取培养后不同组细胞行涂片、瑞特一姬姆萨染色，于光学显微镜下观察细胞形态。

实验结果1.药物对急性非淋巴白血病细胞的影响:A、B、C、D、E、F6组培养上清液VEGF浓度分别为1640.19土287.10p扩rnl、1596.88土266.18P扩IIil、1242.32士281.95p岁ml、933.99土225.41P扩nil、556.36土250.lsp岁ml、605.86土208.slp扩而。A组、B组之间无统计学差异，A组和C组、B组和C组之间存在明显统计学差异(P<0.05)。A组和D组存在明显统计学差异(P<0.01)。E、F组与A、B、C3组均有统计学差异，F组与D组相比VEGF值有所下降，但无统计学差异(P二0.052)。

2. 药物对急性非淋巴白血病细胞凋亡的影响:单独应用沙利度胺未诱导出细胞凋亡。AsZ 03可以诱导细胞凋亡。两药联合应用细胞凋亡无明显增加。3.细胞形态学检测:单用沙利度胺对细胞形态无明显影响，A气03与联合用药组细胞体积明显变小，核浓缩甚至碎裂。

参考文献

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