检测水中叶绿素A的意义以及方法

绿色植物利用叶绿素进行光合作用，叶绿素主要有叶绿素A和叶绿素B两种，属于合成天然低分子有机化合物，不溶于水，而溶于有机溶剂，如乙醇、丙酮、乙醚、氯仿等。叶绿素A是水质参数中的重要生物指标，本文将介绍检测水中叶绿素A的意义以及方法。

水中的叶绿素A

叶绿素A可直接反映水体中藻类的生长情况，含量高，则藻类多，含量低，则藻类少。过多的藻类使得水体透明度和溶解氧降低，影响水表面下生物进行光合作用，造成水质恶化，加速水体老化，是促使水体富营养化的重要原因。因此，叶绿素A是反映水体富营养化的重要指标，测定水体中叶绿素A的浓度，对控制水体富营养化程度，恢复水环境功效具有重要的作用。当水体中叶绿素A的浓度在25～500ug/L时，可作为水体富营养化的依据之一。

对水体中藻类及其它浮游植物叶绿素A的测定，目前方法众多，一般使用较多的为研磨法，该方法需要将过滤、冷冻后的植物组织加入适量90％丙酮，而后充分研磨，在研磨过程中易造成组织中叶绿素的流失，而丙酮对人体有一定的毒性且常温下萃取效率较低，使得测定的叶绿素A偏低，不利于评测水体富营养化程度。

方法进展

为了解决上述问题，专利 CN101858857A 提供了一种新的富营养化水体中浮游植物叶绿素A的分析测定方法，将传统的研磨法的主要工序加以改进，摒弃研磨工序，使用热乙醇替代丙醇，引入水浴和超声工序，提高叶绿素提取和萃取效率，从而达到高效准确测定富营养化水体中叶绿素A的目的。步骤如下：

(1)样品的前处理：按照传统的检测水体中浮游植物的叶绿素的取样方法采集水样，将200～500ml的水样通过抽滤器抽滤，将抽滤后的滤膜以及附着于其上的浮游植物置于10～25mL具塞离心管中，然后放入-18℃冰箱中冷冻6～8小时；

(2)样品的萃取：从冰箱取出步骤(1)的具塞离心管恢复至室温状态后，向离心管中加入10mL 80℃的90％乙醇，于80℃水浴2min后，于超声波清洗机内超声10min，然后避光静置萃取3～5h后以4000r/min的转速离心10min，取上清液待测；

(3)上清液的测定及水体中浮游植物叶绿素A的浓度计算：取步骤(2)所得上清液在分光光度计上测定上清液的叶绿素A的吸光度；首先以90％乙醇作空白吸光度测定，对上清液吸光度进行校正；而后开始测定上清液的吸光度，先在665nm波长测上清液吸光系数E665，再在750nm波长测上清液吸光系数E750，然后在装有上清液的比色皿中加入0.1～0.2毫升1.0mol/L盐酸进行酸化，加盖摇匀，静置1min后重新在665nm波长测定经过酸化处理后的上清液的吸光系数A665，再在750nm波长测其吸光系数A750，计算水体中浮游植物叶绿素A。