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叶绿素A的制备与含量测定

发布日期:2020/4/24 12:09:50

背景及概述[1][2]

叶绿素A是一种包含在浮游植物的多种色素中的重要色素。在浮游植物中,占有机物干重的1%〖KG-1.3mm〗~2%,是估算初级生产力和生物量的指标,也是赤潮监测的必测项目。

制备[2]

高纯度叶绿素a的制备方法的具体步骤如下:

取生长至对数生长期后期的钝顶螺旋藻藻液1L,离心分离 藻体,弃去上清液,沉淀富集在1个离心管中,然后用50mL乙醇萃 取三次,萃取液合并。

萃取液中加入适量石油醚(60~90℃),加水至分相,含色 素的石油醚相用水洗涤两次。

在层析柱中填充100-200目中性氧化铝,先用含0.3%乙醇的 石油醚溶液润湿氧化铝柱,然后上样,再采用0.3%、10%的乙醇- 石油醚混合溶剂梯度冲洗。先冲出的是橙黄色的类胡萝卜素,后冲出 的是蓝绿色的叶绿素。旋蒸回收溶剂,获得墨绿色的叶绿素a沉淀。

含量测定[3-4]

报道一、测定水中叶绿素a的方法,按以下步骤进行:

一、取50~200ml水样,采用0.45μm醋酸纤维滤膜进行过滤,真空泵压力控制在 0.05MPa,获得截留有藻细胞的滤膜;

二、将截留有藻细胞的滤膜剪碎放入装有6ml体积 浓度为90%的乙醇溶液的离心管中,置于4℃冷藏12~24h;

三、然后将离心管于8000r/min 离心15min,收集上清液,再向离心管中补加4ml体积浓度为90%的乙醇溶液,再于 8000r/min离心5min,收集上清液,合并两次离心获得的上清液,并加入质量浓度为90% 的乙醇溶液定容至10ml,得萃取液;

四、将萃取液于8000r/min离心5min,得萃取液上清液,以质量浓度为90%的乙醇溶液做参比,用分光光度计测定萃取液上清液在630nm、 647nm、664nm和750nm波长下的吸光度值,按以下公式计算水体中叶绿素a的含量: Chla=[12.12(D664‑D750)‑1.58(D647‑D750)‑0.08(D630‑D750)]Ve/V;其中Chla 为水样中叶绿素a的含量,μg/L;D630、D647、D664和D750分别为萃取液上清液在 630nm、647nm、664nm和750nm波长下的吸光度值;Ve为萃取液的总体积,ml;V为 抽滤的水样体积,L。

报道二、

一种枣树冠层叶绿素a含量的检测方法,包括以下步骤:

(1)选择晴朗、无云或少量云层、风力小于3级的天气采集所需测定叶绿素a含量枣 树冠层的高光谱信息。

(2)对高光谱数据进行多元散射校正后,采用小波降噪,再进行平滑处理。

(3)提取待测定叶绿素a含量枣树冠层的483、554、600、760、954、1153、1340、 1406nm波长的光谱反射率值。

(4)将各波长的反射率值代入枣树冠层叶绿素a含量检测模型:

y=0.58939-13.23222x1+0.070986x2-9.943082x3+7.431762x4-11.9541x5- 4.926803x6+15.15402x7+5.408735x8

其中,y为枣树冠层叶绿素a含量,单位为mg/g,x1、x2、x3、x4、x5、x6、x7、x8分别为枣树 冠层在波段483、554、600、760、954、1153、1340、1406nm的反射率值。

主要参考资料

[1] 水利大辞典

[2] [中国发明] CN201510528132.6 一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿素a的方法

[3] [中国发明] CN201210046341.3 一种测定水中叶绿素a的方法

[4] [中国发明] CN201610361871.5 一种枣树冠层叶绿素a含量的检测方法

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