叶绿素A的制备与含量测定

背景及概述^[1][2]

叶绿素A是一种包含在浮游植物的多种色素中的重要色素。在浮游植物中，占有机物干重的1%〖KG-1.3mm〗～2%，是估算初级生产力和生物量的指标，也是赤潮监测的必测项目。

制备^[2]

高纯度叶绿素a的制备方法的具体步骤如下：

取生长至对数生长期后期的钝顶螺旋藻藻液1L，离心分离 藻体，弃去上清液，沉淀富集在1个离心管中，然后用50mL乙醇萃 取三次，萃取液合并。

萃取液中加入适量石油醚(60～90℃)，加水至分相，含色 素的石油醚相用水洗涤两次。

在层析柱中填充100-200目中性氧化铝，先用含0.3％乙醇的 石油醚溶液润湿氧化铝柱，然后上样，再采用0.3％、10％的乙醇－ 石油醚混合溶剂梯度冲洗。先冲出的是橙黄色的类胡萝卜素，后冲出 的是蓝绿色的叶绿素。旋蒸回收溶剂，获得墨绿色的叶绿素a沉淀。

含量测定^[3-4]

报道一、测定水中叶绿素a的方法，按以下步骤进行：

一、取50～200ml水样，采用0.45μm醋酸纤维滤膜进行过滤，真空泵压力控制在 0.05MPa，获得截留有藻细胞的滤膜；

二、将截留有藻细胞的滤膜剪碎放入装有6ml体积 浓度为90％的乙醇溶液的离心管中，置于4℃冷藏12～24h；

三、然后将离心管于8000r/min 离心15min，收集上清液，再向离心管中补加4ml体积浓度为90％的乙醇溶液，再于 8000r/min离心5min，收集上清液，合并两次离心获得的上清液，并加入质量浓度为90％ 的乙醇溶液定容至10ml，得萃取液；

四、将萃取液于8000r/min离心5min，得萃取液上清液，以质量浓度为90％的乙醇溶液做参比，用分光光度计测定萃取液上清液在630nm、 647nm、664nm和750nm波长下的吸光度值，按以下公式计算水体中叶绿素a的含量： Chla＝[12.12(D664‑D750)‑1.58(D647‑D750)‑0.08(D630‑D750)]Ve/V；其中Chla 为水样中叶绿素a的含量，μg/L；D630、D647、D664和D750分别为萃取液上清液在 630nm、647nm、664nm和750nm波长下的吸光度值；Ve为萃取液的总体积，ml；V为 抽滤的水样体积，L。

报道二、

一种枣树冠层叶绿素a含量的检测方法，包括以下步骤：

(1)选择晴朗、无云或少量云层、风力小于3级的天气采集所需测定叶绿素a含量枣 树冠层的高光谱信息。

(2)对高光谱数据进行多元散射校正后，采用小波降噪，再进行平滑处理。

(3)提取待测定叶绿素a含量枣树冠层的483、554、600、760、954、1153、1340、 1406nm波长的光谱反射率值。

(4)将各波长的反射率值代入枣树冠层叶绿素a含量检测模型：

y＝0.58939-13.23222x1+0.070986x2-9.943082x3+7.431762x4-11.9541x5- 4.926803x6+15.15402x7+5.408735x8

其中，y为枣树冠层叶绿素a含量，单位为mg/g，x1、x2、x3、x4、x5、x6、x7、x8分别为枣树 冠层在波段483、554、600、760、954、1153、1340、1406nm的反射率值。

主要参考资料

[1] 水利大辞典

[2] [中国发明] CN201510528132.6 一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿素a的方法

[3] [中国发明] CN201210046341.3 一种测定水中叶绿素a的方法

[4] [中国发明] CN201610361871.5 一种枣树冠层叶绿素a含量的检测方法