人B淋巴母细胞的应用

背景^[1-3]

人B淋巴母细胞是一种免疫细胞，来源于骨髓的多能干细胞，能够增殖分化，产生B淋巴细胞。B淋巴细胞在抗原刺激下可分化为浆细胞，浆细胞可合成和分泌抗体（免疫球蛋白），主要执行机体的体液免疫（humoralimmunity）。

人B淋巴母细胞是一种白血病细胞，是B淋巴细胞的前体细胞。它们在骨髓中产生，并通过血液和淋巴系统传播到全身各个部位。人B淋巴母细胞的异常增殖和聚集是导致多种B细胞恶性肿瘤(如急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病等)的主要原因之一。

人B淋巴母细胞

人B淋巴母细胞培养操作

1)复苏人B淋巴母细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)人B淋巴母细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)人B淋巴母细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

人B淋巴母细胞可以用于铜离子及模拟太空环境通过ROS/AMPK信号诱导人B淋巴母细胞凋亡

AMPK是生物体内能量代谢调节的重要信号分子,也是细胞内多种信号通路的中间分子,在细胞凋亡过程中也是必不可少的。之前的研究发现,Cu2+和模拟太空环境可以通过ROS诱导细胞凋亡,因此AMPK是否参与此过程是我们关注的重点。

我们的结果显示：1)Cu2+可引起人B淋巴母细胞内AMPK发生磷酸化并呈现浓度和时间依赖性,同时也可引起细胞内ROS增加,细胞增殖抑制和细胞凋亡增加。

2) 抗氧化剂NAC可降低由Cu2+引起的AMPK高磷酸化水平和ROS的生成,并缓解因此而造成的细胞增殖抑制。

3) 模拟太空环境(模拟微重力效应下重离子辐射)也可引起细胞内AMPK磷酸化水平的增加,并呈现辐射剂量和时间依赖性。

4) 模拟太空环境可造成短期内细胞增殖抑制,抗氧化剂NAC对此有缓解作用,随着细胞代数的增加细胞增殖逐渐恢复正常。

5) 模拟太空环境处理过的细胞恢复正常后再次受到外界氧化胁迫(外源性H2O2处理)时,细胞增殖能力仍然存在差异。

6)通过microRNA测序结果以及对数据库查找分析发现has-miR-185、has-miR-23b、has-miR-27a、has-miR-642a和has-miR-7704可能参与模拟太空环境诱导的细胞增殖抑制。总之,Cu2+和模拟太空环境可引起人B淋巴母细胞内ROS生成,并诱导细胞内AMPK活化最终导致细胞凋亡。模拟太空环境引起AMPK的活化可能有部分microRNA参与其中。

参考文献

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[3]Effects of copper overload in P19 neurons:impairment of glutathione redox homeostasis and crosstalk between caspase and calpain protease systems in ROS-induced apoptosis[J].Maja Jazvin??ak Jembrek;;Josipa Vlaini?;;Vedrana Radovanovi?;;Julija Erhardt;;Nada Or?oli?.BioMetals,2014(6)

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[5]张二东.铜离子及模拟太空环境通过ROS/AMPK信号诱导人B淋巴母细胞凋亡[D].兰州大学,2016.