毛蕊异黄酮苷

背景技术

黄芪为临床常用中药，有补气升阳、固表止汗、利水消肿等功效，所含的皂苷和黄酮类成分为其主要活性成分。毛蕊异黄酮苷和芒柄花苷是黄芪中含量较高的两个黄酮苷类化合物，2010版中国药典已将毛蕊异黄酮苷作为黄芪的质控指标成分之一。由于该化合物极性较大，获取高纯度对照品较为困难，因此市场上该对照品价格昂贵(1250-1800元/10mg)，且经常处于缺货状态。黄芪为临床大宗药材，使用量较大，缺少高纯度对照品严重影响了黄芪等相关制品的质量评价、生产销售及制约了相关新药的研发步伐。发展高纯度毛蕊异黄酮苷及芒柄花苷的高效制备方法，尤其规模化制备技术具有重要意义。

目前，从黄芪中制备黄酮苷类化合物的报道较少，中国专利(CN00710176318.5)报道采用萃取、树脂层析富集及反复重结晶等获取纯度约为97％的毛蕊异黄酮苷，其中重结晶的次数为5-7次，过程较繁琐且重结晶损失量较大。而同时获取规模化毛蕊异黄酮苷和芒柄花苷的制备研究未见文献报道。

制备方法

1)硅胶柱色谱富集：

黄芪醇提物100g，硅胶减压色谱(21cm*12cm)分离，5倍柱体积的乙酸乙酯∶甲醇(9∶1)洗脱，500ml每份收集流份，薄层色谱检测，其中展开剂为乙酸乙酯∶甲醇∶水(9∶1∶0.5)，显色剂为体积浓度5％的硫酸乙醇溶液，合并Rf值为0.4-0.6的流份，减压干燥得棕黄色粉末750mg；

2)树脂柱除杂：

棕黄色粉末用10％乙醇溶液溶解，四层纱布过滤，清液上HPD-100树脂柱分离，其中样品∶树脂比例为1∶6(g∶ml)，分别以5倍柱体积的水、25％乙醇溶液、45％乙醇溶液洗脱，分别收集25％乙醇洗脱物，浓缩干燥得毛蕊异黄酮苷粗品200mg(图2)；收集45％洗脱物，浓缩干燥得芒柄花苷粗品25mg；

3)反相高效液相制备色谱精制：

上述粗品用体积分数为40％的甲醇溶液溶解，配置样品浓度为50mg/ml，经0.45μm微孔滤膜过滤；滤液采用柱长10cm、直径2cm的高效液相制备色谱柱进行分离，制备色谱柱的填充填料为6μm C18(Novapak)；毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷的进样体积分别为4ml和0.5ml，采用的流动相为体积分数为40％的甲醇-水溶液，流速控制在10ml/min，紫外检测器254nm监测，收集各自制备图谱中主要的色谱峰，60℃减压干燥即可得到纯度大于98％的毛蕊异黄酮苷92mg，芒柄花苷10mg，收率约为89％，它们的外观为白色粉末。