斯氏分枝杆菌PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

斯氏分枝杆菌PCR试剂盒是一种用于检测斯氏分枝杆菌的PCR试剂盒。

PCR是一种分子生物学技术，通过特定的引物和DNA聚合酶，将特定的DNA片段在体外进行快速、特异的扩增。PCR检测试剂盒通常包含各种成分，如DNA聚合酶、dNTPs（即dATP、dTTP、dCTP、dGTP）、MgCl2（即二价镁离子）、反应缓冲液等。

斯氏分枝杆菌是一种革兰氏阳性菌，属于分枝杆菌属。由于其细胞壁的结构较为特殊，因此需要使用针对该菌种的特定PCR检测试剂盒来进行检测。

斯氏分枝杆菌PCR试剂盒是一种用于检测斯氏分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的分子生物学工具。这种试剂盒通常包含PCR反应所需的所有成分，如引物、dNTPs、缓冲液、酶等。

PCR(聚合酶链反应)是一种分子生物学技术，用于扩增特定的DNA片段。在斯氏分枝杆菌PCR试剂盒中，引物是特异性地识别并结合到斯氏分枝杆菌DNA上的短链DNA序列。当这些引物与目标DNA结合时，它们会触发DNA聚合酶的活性，从而使目标DNA片段得以扩增。

斯氏分枝杆菌PCR试剂盒通常用于实验室研究和诊断，例如在检测和鉴定感染性疾病、研究病原体传播途径以及开发新的治疗方法等方面。然而，需要注意的是，这种试剂盒的使用需要遵循严格的实验操作规程，以确保结果的准确性和可靠性。

斯氏分枝杆菌PCR试剂盒

斯氏分枝杆菌PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在斯氏分枝杆菌的感染。

应用^[4-5]

斯氏分枝杆菌PCR试剂盒可以用于广西北部湾红树林植物内生放线菌多样性、新种多相分类及抗菌活性研究

研究广西北部湾红树林植物内生放线菌多样性、新颖性及抗菌活性,以期发现放线菌新物种和抗菌活性菌株,为完善放线菌物种多样性和发现新抗生素提供菌种资源储备。

方法:62份植物样品经表面消毒粉碎后,撒在10种分离培养基上分离植物内生放线菌;通过斯氏分枝杆菌PCR试剂盒PCR扩增和测序获得其16S r RNA基因序列,并提交到Ez Bio Cloud数据库中进行相似性搜索比对分析及构建基于16S r RNA基因序列的系统进化树,对放线菌多样性进行分析;采用分子分类研究、生理生化研究和细胞化学组分研究等多相分类方法对6株潜在新菌株进行鉴定;采用斯氏分枝杆菌PCR试剂盒PCR方法扩增87株放线菌NRPS、PKS I、PKS II等抗生素生物合成基因簇,然后用琼脂糖凝胶电泳进行检测;通过部分菌株发酵、乙酸乙酯萃取发酵液得到粗提液样品,并采用纸片扩散法对样品进行抗菌活性筛选。

结果:1.从植物样品共分离出菌株795株,其中放线菌416株,分布于14个目23个科39个属,包括放线异壁酸菌属(Actinoallomurus)、放线链孢菌属(Actinomycetospora)、游动放线菌属(Actinoplanes)、短状杆菌属(Brachybacterium)、Catenuloplanes、纤维单胞菌属(Cellulomonas)、纤维微菌属(Cellulosimicrobium)、Cryptosporangium、短小杆菌属(Curtobacterium)、甲基萘醌菌属(Demequina)、Gryllotalpicola、栖白蚁菌属(Isoptericola)、动球菌属(Kineococcus)、Klenkia、皮革球菌属(Kytococcus)、雷夫松氏菌属(Leifsonia)、微杆菌属(Microbacterium)、微球菌属(Micrococcus)、小月菌属(Microlunatus)、小单胞菌属(Micromonospora)、微白霜菌属(Micropruina)、贫养杆菌属(Modestobacter)、分支杆菌属(Mycobacterium)、Mycolicibacterium、诺卡氏菌属(Nocardia)、类诺卡氏菌属(Nocardioides)、海藻球菌属(Phycicoccus)、Protaetiibacter、Pseudactinotalea、假动球菌属(Pseudokineococcus)、Quadrisphaera、红球菌属(Rhodococcus)、罗氏菌属(Rothia)、糖多孢菌(Saccharopolyspora)、丝氨酸球菌属(Serinicoccus)、Sphaerimonospora、链霉菌属(Streptomyces)、Wangella和威廉姆斯氏菌(Williamsia)。其中短小杆菌属(33.9%)、链霉菌属(16.1%)、微杆菌属(8.2%)和Mycolicibacterium(7.5%)为优势菌属。

参考文献

[1]Phytocompound Mediated Blockage of Quorum Sensing Cascade in ESKAPE Pathogens[J].Ghosh Sreejita;Lahiri Dibyajit;Nag Moupriya;Dey Ankita;Pandit Soumya;Sarkar Tanmay;Pati Siddhartha;Abdul Kari Zulhisyam;Ishak Ahmad Razali;Edinur Hisham Atan;Ray Rina Rani.Antibiotics,2022

[2]Metabolomics Tools Assisting Classic Screening Methods in Discovering New Antibiotics from Mangrove Actinomycetia in Leizhou Peninsula[J].Lu QinPei;Huang YongMei;Liu ShaoWei;Wu Gang;Yang Qin;Liu LiFang;Zhang HaiTao;Qi Yi;Wang Ting;Jiang ZhongKe;Li JunJie;Cai Hao;Liu XiuJun;Luo Hui;Sun ChengHang.Marine Drugs,2021

[3]Phycicoccus mangrovi sp.nov.,a novel endophytic actinobacterium isolated from bark of Sonneratia apetala[J].Chen Ming-Sheng;Chen Xiao-Hui;Yan Xiao-Rui;Li Fei-Na;Tuo Li.Systematic and Applied Microbiology,2021

[4]Microplastics in mangroves and coral reef ecosystems:a review.[J].John Juliana;Nandhini A R;Velayudhaperumal Chellam Padmanaban;SillanpääMika.Environmental chemistry letters,2021

[5]陈明胜.广西北部湾红树林植物内生放线菌多样性、新种多相分类及抗菌活性研究[D].遵义医科大学,2023.