液质联用测定尿液中可替宁的方法

背景技术

烟碱俗称尼古丁，是一种存在于茄科植物(茄属)中的生物碱，也是烟草的重要成分，占烟草中总生物碱的98%。烟碱是烟草的主要活性成分，也是导致吸烟成瘾或产生依赖性的主要因素。进入人体内的尼古丁约80%在肝脏中的细胞色素酶P4502A6的作用下代谢为可替宁。可替宁随血液进入到人体各个部位，在血液、尿液、唾液等体液和肝脏及脑等器官中均发现可替宁的分布。可替宁在体内的半减期为18~22h，且由于尼古丁是可替宁的唯一来源，因此是目前公认的评价卷烟烟气暴露的特异性生物标志物。

由于尿液具有非创伤性、来源广等特点，被广泛的用来评价卷烟烟气暴露情况。分析尿液中可替宁的方法主要有：酶联免疫法、毛细管电泳化学发光法、气相色谱-质谱法、液相色谱法和液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)。LC-MS/MS比传统的分析方法灵敏度更高，选择性更强，但往往需要繁琐的液液萃取或者固相萃取来净化尿液样本。Fan等建立了一个直接稀释过滤进样分析尿液中可替宁的LC-MS/MS方法，此方法简化了前处理过程，选取了一根常规的液相色谱柱(柱径:4.6mm,粒径:5μm)，但其分离的效果不如小粒径、窄内径的质谱色谱柱；且过大的流速(1mL/min)会增加有机溶剂和雾化气体的损耗。本文将介绍一种简单、快速、选择性好的测定尿液中的可替宁的LC-MS/MS方法，用于中国烤烟型卷烟吸食人群尿液中可替宁的测定。

检测方法

1、样品处理

尿液样品于室温下解冻，混合均匀后，取100μL的尿液，加入20μL的氘代内标(可替宁-d₃)，加入880μL纯水，以10000r/min离心10min。离心的上清液过0.22μm聚醚砜水相滤膜，取5μL滤液引入LC-MS/MS分离分析。

2、试验条件

2.1、色谱条件：Agilent Zorbax Eclipse XDB-Cs色谱柱(150mmx2.1mm,3.5μm);流动相A：0.1%甲酸水溶液；流动相B：0.1%乙酸甲醇溶液；柱温40℃；进样量5μL。梯度洗脱条件：0~2min,30%B；2~5min,90%B；5~7min,30%B；7~8min,30%B；流速为200μL/min时洗脱尿液样品，分析时间为8min。

2.2、质谱条件：电喷雾离子源，多反应监测正离子扫描方式；电喷雾电压：5000V；雾化气压力：348kPa；气帘气压力：209kPa；辅助加热气压力：348kPa；温度：500℃；碰撞电压：10eV；去簇电压：58V；驻留时间：100ms。

参考文献

[1]刘彤,侯宏卫,张小涛,等. 液相色谱-串联质谱法测定尿液中的可替宁[J]. 质谱学报,2012,33(4):252-256.