高效免疫组化二抗试剂盒

背景^[1-7]

高效免疫组化二抗试剂盒基于聚合物技术的最新一代免疫组化二抗非生物素检测系统，与传统的免疫组化二抗试剂盒相比，具有以下特点：

1.信号更强、操作更加简单，可有效减少一抗使用量，一抗试剂可再稀释2-4倍，节省实验成本；

2.避免生物素的使用，从而避免由生物素引起的非特异性背景显色，显色更清晰，背景更干净；

3.快速更短的试剂孵育时间，节省时间成本；

免疫组化（IHC）是利用抗原与抗体的特异性结合原理和特殊的标记技术，通过化学反应使标记抗体显色，对组织细胞内的特异性抗原进行定位、定性、定量检测的一门技术。本文主要总结二抗原理及其特点，以提供更好的选择。

检测方法原理：

1.SABC法

原理：SABC法是利用链酶亲和素(Streptavidin)与生物素(Biotin)特有的高度亲和力这一生物学性质，先将生物素与辣根过氧化物酶(HRP)结合，形成生物素化HRP，然后与链酶亲和素按一定比例混合，形成SABC复合物。用生物素化二抗与抗体结合，再与SABC复合物联结形成抗原～抗体～生物素化二抗～SABC复合物。最后用底物显色剂显色。

特点：该法具有灵敏度高以及低背景染色等特点。

2.SP法

原理：根据生物素(Biotin)与链霉亲和素(Streptavidin)具有强结合力的原理设计。在一抗（兔源与鼠源）与相应的靶抗原结合后，生物素化标记的抗多价二抗与一抗特异结合；二抗上标记的生物素与标记了辣根过氧化物酶（HRP）的链霉亲和素结合，形成抗原～特异性一抗～生物素化的二抗～HRP标记的链霉亲和素复合物。

特点：该法孵育时间短（通常为10min），灵敏度高以及低背景染色等特点。

3.Polymer酶标二抗法

原理：该法采用一段多聚氨基酸聚合物做为载体链，将该多聚物与二抗结合，然后可再标记上多个HRP/AP酶分子，所以同样具有很高的信号放大作用。

特点：灵敏度高；操作步骤简单；无需进行内源性的生物素封闭。

4.直接酶标二抗法

该法是将HRP/AP酶分子直接标记于二抗上。因此需要普通的酶标二抗即可完成。实验简单，成本低，但是因为没有信号放大作用，所以对很多表达丰度不是很高的抗原就可能检测不到。

应用^[8]

高效免疫组化二抗试剂盒可用于检测疾病的标记物检测以及疾病诊断：

例如在诊断曲霉菌性鼻窦炎的实验中用免疫组化方法在诊断曲霉菌性鼻窦炎。方法:采用Envision免疫组织化学二步法对怀疑曲霉菌性鼻窦炎的标本和对照标本染色,并与真菌学检查和HE、PAS染色进行对比。结果:40例中真菌培养19例为曲霉,4例污染菌,常规HE和PAS染色均可见菌丝或孢子,但不能确定种属,免疫组化染色耗时5~24h,示40例阳性,染色背景清晰,对比度强。4例对照标本免疫组化染色阴性。结论:此方法可敏感、特异地检出组织中的曲霉菌,为利用免疫组化方法诊断曲霉菌性鼻窦炎提供了实验依据,有助于临床诊断和研究。

参考文献

[1]Immunohistologic identification of Aspergillus spp.and other hyaline fungi by using polyclonal fluorescent antibodies.Kaufman L,Paul G,Standard S,et al.Journal of Clinical Microbiology.1997

[2]Diagnosis of systemic mycoses by specific immunohistochemical tests.Jensen HE,Schonheyder HC,Hotchi M,et al.Acta Pathologica Microbiologica et Immunologica Scandinavica.1996

[3]Production of specific monoclonal antibodies to Aspergillus species andtheir use inimmu-nohistochemical identification of aspergillus.Fenelon LE,Hamilton AJ,Figueroa JI,et al.Journal of Clinical Microbiology.1999

[4]Up-Regulation of the Lymphatic Marker Podoplanin,a Mucin-Type Transmembrane Glycoprotein,in Human Squamous Cell Carcinomas and Germ Cell Tumors[J].Vivien Schacht,Soheil S.Dadras,Louise A.Johnson,David G.Jackson,Young-Kwon Hong,Michael Detmar.The American Journal of Pathology.2005(3)

[5]Ber EP4 and epithelial membrane antigen aid distinction of basal cell,squamous cell and basosquamous carcinomas of the skin[J].T WBeer,PShepherd,J MTheaker.Histopathology.2001(3)

[6]Sebaceoma.A distinctive benign neoplasm of adnexal epithelium differentiating toward sebaceous cells.Troy J L,Ackerman A B.The American Journal of dermatopathology.1984

[7]Sebaceoma and related neoplasms with sebaceous differentiation:a clinicopathologic study of 30 cases.Misago Noriyuki,Mihara Ichiro,Ansai Shin-ichi,Narisawa Yutaka.The American Journal of dermatopathology.2002

[8]周晓谦,杨秀敏,王毓新,庄逢康.应用Envision免疫组化二步法诊断曲霉菌性鼻窦炎[J].中国麻风皮肤病杂志,2006(09):720-722.