人解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA KIT

背景^[1-7]

人解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA KIT是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。利用产生颜色以及颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系来检测未知样品的种类及浓度。

试剂盒包含以下各组分：

（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；

（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；

（3）酶的底物；

(4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；

（5）结合物及标本的稀释液；

（6）洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；

（7）酶反应终止液，常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的最终体积而异，在板式ELISA中一般采用2mol/L。

结果判定常用的几种方法

1)目测定性法：加入底物经酶解和终止反应后，肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照；与阴性对照的颜色接近者，判定为阴性。

2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2～3SD，作为阳性结果的阈值。

3)以P／N值(阳性孔OD值／阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性；P／N值小于2.1，但大于1.5为可疑；P／N小于1.5为阴性。

4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

注意事项：

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

应用^[8]

人解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA KIT可用于科研试验中人解整合素样金属蛋白酶9的浓度检测：

ADAM22在前列腺癌中的分布和意义。制备其特异性抗体。判断细胞因子对其调节及分子机理。其对肿瘤凋亡的影响,从而从新的角度探讨前列腺癌的发病及病理情况,为前列腺癌的诊治和预后建立新的评判角度。方法:RT-PCR法克隆ADAM22 cDNA,将其胞膜外区插入载体,诱导表达并纯化,免疫小鼠制备单克隆抗体并利用流式细胞术、western blot和ELISA进行鉴定。

参考文献

[1]The Many Roles of FAS Receptor Signaling in the Immune System[J].Andreas Strasser,Philipp J.Jost,Shigekazu Nagata.Immunity.2009(2)

[2]Polymorphisms in Genes Involved in Androgen Pathways as Risk Factors for Prostate Cancer[J].Nina Mononen,Johanna Schleutker.The Journal of Urology.2009(4)

[3]Toll-like receptors and their role in carcinogenesis and anti-tumor treatment[J].Anna Wolska,Ewa Lech-Marańda,Tadeusz Robak.Cellular&Molecular Biology Letters.2009(2)

[4]Prostate cancer[J].Jan-Erik Damber,Gunnar Aus.The Lancet.2008(9625)

[5]The ADAM metalloproteinases[J].Dylan R.Edwards,Madeleine M.Handsley,Caroline J.Pennington.Molecular Aspects of Medicine.2008(5)

[6]Decoy Receptor 3 Overexpression and Immunologic Tolerance in Hepatocellular Carcinoma(HCC)Development[J].Caixia Chen,Changgong Zhang,Guohong Zhuang,Hongfang Luo,Jinhua Su,Pinh Yin,Juan Wang.Cancer Investigation.2008(10)

[7]Rewinding the DISC[J].Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis.2008(1)

[8]朱李兵.人解整合素样金属蛋白酶22在前列腺癌中的表达及其意义探讨[D].第四军医大学,2009.