NCI-H660人小细胞癌贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

NCI-H660人小细胞癌贴壁细胞系是一种人小细胞癌贴壁细胞系，来源于63岁成年高加索地区男性的前列腺癌细胞在淋巴结的转移灶。这种细胞系具有上皮细胞样形态，悬浮生长，少量贴附。其规格为T25瓶或者1mL冻存管包装，且保质期为永久。对于这种细胞系的培养，需要注意其具体的培养条件和操作规范，以保证实验的准确性和细胞的健康状态。

NCI-H660人小细胞癌贴壁细胞系

NCI-H660人小细胞癌贴壁细胞系培养操作

1)复苏NCI-H660人小细胞癌贴壁细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)NCI-H660人小细胞癌贴壁细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)NCI-H660人小细胞癌贴壁细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

NCI-H660人小细胞癌贴壁细胞系可以用于脂肪酸、类异戊二烯及奇数碳链脂质LC-MS新型分析方法的开发及应用

基于稳定同位素标记化学衍生化原理,以3-硝基苯肼(3-NPH)及其同位素13C6-3-NPH对Iso P化学衍生化后构建了LC-MS/MS MRM分析方法,该方法可以实现IBP途径中7种代谢产物(MVA、MVAP、MVAPP、IPP/DMAPP、GPP、FPP以及GGPP)的全覆盖,同时能够有效解决Iso P在反相色谱中严重的色谱峰拖尾问题。利用该方法我们检测了人前列腺癌细胞株LNCa P及NCI-H660人小细胞癌贴壁细胞系经过角鲨烯环氧酶抑制剂NB-598 Maleate处理后上游Iso P代谢物的潜在变化情况。

在对人前列腺癌细胞株LNCa P及NCI-H660人小细胞癌贴壁细胞系脂质成分FFAs、Iso P分析的基础上,结合目前基于LC-MS的奇数碳链脂质组学的研究仍较为缺乏,同时奇数碳链脂质陆续被发现在膳食评估、冠心病和II型糖尿病风险的生物标志物、内源性代谢替代途径中的重要功能。利用组织和血浆样本构建了奇数碳链脂质组学的分析方法,该方法以各类脂质在ESI离子源中的特征碎片离子构建MRM检测离子对,经LC-MS/MS定性分析后,以反相色谱中脂质保留时间的规律性确保方法的准确性,进一步建立Scheduled MRM方法,添加脂质组学内标后可定量检测样本中含奇数脂肪酰基碳链的脂质组。对选取样本的分析中,PC对OCFA-磷脂总丰度的贡献最大,这很大程度上归因于PC相对于其他类型磷脂较高的绝对浓度。

同时注意到C15:0与C17:0在特定脂质类别中选择性富集。此外,C13:0、C19:0和C21:0在除PG外的磷脂中均有分布。对单不饱和的奇数碳酰基链脂质而言,C17:1和C19:1在除PG外的磷脂中均有富集,而C17:2仅在PS和PI有显著富集。的分析表明OCFA在不同脂质中分布的异质性可能是由于脂质类别的不同转换或脂肪酸合成酶的选择性,这为奇数碳链脂质的功能研究提供了初步依据。

参考文献

[1]Statin as a therapeutic agent in gastroenterological cancer..Uemura Norio;Hayashi Hiromitsu;Baba Hideo.World journal of gastrointestinal oncology,2022

[2]Optimised Method for Short-Chain Fatty Acid Profiling of Bovine Milk and Serum.Li Cheng;Liu Zhiqian;Bath Carolyn;Marett Leah;Pryce Jennie;Rochfort Simone.Molecules,2022

[3]Gut microbiota and immune system in liver cancer:Promising therapeutic implication from development to treatment..Bartolini Ilenia;Risaliti Matteo;Tucci Rosaria;Muiesan Paolo;Ringressi Maria Novella;Taddei Antonio;Amedei Amedeo.World journal of gastrointestinal oncology,2021

[4]Targeting the Tumor Microenvironment:A Literature Review of the Novel Anti-Tumor Mechanism of Statins.Zhu Peng Fei;Wang Ming Xing;Chen Zhe Ling;Yang Liu.Frontiers in Oncology,2021

[5]张建钢.脂肪酸、类异戊二烯及奇数碳链脂质LC-MS新型分析方法的开发及应用[D].中国人民解放军陆军军医大学,2023.