肉芽肿性曼氏杆菌病PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

肉芽肿性曼氏杆菌病PCR试剂盒是一种用于检测肉芽肿性曼氏杆菌病的PCR技术试剂盒。这种试剂盒采用了特定的引物和探针，能够特异性地扩增肉芽肿性曼氏杆菌的基因片段，从而帮助快速诊断该病。

使用肉芽肿性曼氏杆菌病PCR试剂盒进行检测时，需要将样本中的DNA提取出来，然后与试剂盒中的引物和探针进行反应。如果样本中存在肉芽肿性曼氏杆菌的DNA，就会在PCR反应中扩增出相应的基因片段，从而可以确诊该病。

PCR(聚合酶链反应)是一种常用的分子生物学技术，可以扩增和检测特定的DNA序列。在肉芽肿性曼氏杆菌病的诊断中，PCR试剂盒可以通过检测患者体液或组织样本中的肉芽肿性曼氏杆菌DNA来确定感染的存在。

肉芽肿性曼氏杆菌病PCR试剂盒

使用PCR试剂盒进行肉芽肿性曼氏杆菌病的检测通常包括以下步骤：

1.样本采集：从患者体液或组织样本中采集一定量的DNA。

2.DNA提取：将采集到的DNA进行提取，以获得纯净的DNA样本。

3.PCR反应：将提取到的DNA样本与肉芽肿性曼氏杆菌特异性引物混合，进行PCR反应。PCR反应会扩增肉芽肿性曼氏杆菌的DNA序列，并在特定条件下产生可见的荧光信号。

4.结果分析：根据PCR反应产生的荧光信号，判断是否存在肉芽肿性曼氏杆菌感染。阳性结果表示肉芽肿性曼氏杆菌感染存在，阴性结果则表示未检测到该菌。

应用^[4-5]

肉芽肿性曼氏杆菌病PCR试剂盒可以用于溶血性曼氏杆菌PCR检测方法比较及四川五个地区山羊曼氏杆菌感染的调查

研究从四川省部分地区采集山羊鼻拭子样本,对多种曼氏杆菌进行了病原检测及分离鉴定,同时对分离得到的部分曼氏杆菌菌株sod A基因进行了遗传进化分析,为曼氏杆菌感染防控提供了参考依据。

1. 溶血性曼氏杆菌PCR方法的比较研究本研究选用肉芽肿性曼氏杆菌病PCR试剂盒针对溶血性曼氏杆菌lktD、gcp、rpt2、phssa、16Sr RNA及art J-lkt C六种靶基因所建立的6种PCR方法(即:lktD-PCR、gcp-PCR、rpt2-PCR、phssa-PCR、16Sr RNA-PCR和art J-lkt C-PCR),首先对各引物进行生物信息学分析,在此基础上比较了各PCR方法的特异性、敏感性,同时对各方法鼻拭子样本检出率和模拟感染肺组织样本检出能力进行了对比分析。

2. 结果:(1)生物信息学分析发现,针对gcp、phssa、art J-lkt C、16Sr RNA四种靶基因的引物序列,都仅与溶血性曼氏杆菌靶基因高度同源,与其他病原无同源性。lktD-PCR的引物除能与溶血性曼氏杆菌靶基因片段完全匹配外,与其他几种曼氏杆菌均有同源性,提示其特异性不强。rpt2-PCR的引物与不同溶血性曼氏杆菌靶基因所匹配出的目标片段长度不一,可能与该基因片段容易发生变异有关。

(2) 特异性比较研究发现,lktD-PCR、gcp-PCR及phssa-PCR能扩增出本研究中三种曼氏杆菌,为曼氏杆菌属特异性PCR;16Sr RNA-PCR、art J-lkt C-PCR和rpt2-PCR具有溶血性曼氏杆菌种特异性,但通用性不强,而将这三种曼氏杆菌种特异性PCR方法联合使用则能对本研究中菌株盘中14株溶血性曼氏杆菌全部检出。

(3) 通过敏感性比较研究发现,三种曼氏杆菌“属”肉芽肿性曼氏杆菌病PCR试剂盒特异性PCR方法中lktDPCR敏感性最高,可用作临床曼氏杆菌感染初步检测。三种溶血性曼氏杆菌“种”特异性PCR方法中16Sr RNA-PCR的敏感性最高。

(4) 通过对鼻拭子样本检出率比较发现,肉芽肿性曼氏杆菌病PCR试剂盒lktD-PCR检出率最高为55.56%。通过对肺组织溶血性曼氏杆菌模拟感染样本检测比较发现,各PCR方法都能扩增出特异性条带,可直接用于临床肺组织样本的检测。

参考文献

[1]Emergence of fatal Mannheimia haemolytica infections in cattle in the Netherlands.Biesheuvel M.M.;van Schaik G.;Meertens N.M.;Peperkamp N.H.;van Engelen E.;van Garderen E..The Veterinary Journal,2021

[2]Mannheimia pernigra sp.nov.,isolated from bovine respiratory tract.Kuhnert Peter;Brodard Isabelle;Schönecker Lutz;Akarsu Hatice;Christensen Henrik;Bisgaard Magne.International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology,2021

[3]Serotyping,Genotyping and Virulence Genes Characterization of Pasteurella multocida and Mannheimia haemolytica Isolates Recovered from Pneumonic Cattle Calves in North Upper Egypt..Abed Ahmed H;ElSeedy Fawzy R;Hassan Hany M;Nabih Ashraf M;Khalifa Eman;Salem Salwa E;Wareth Gamal;Menshawy Ahmed M S.Veterinary sciences,2020

[4]Granulomatous Inflammation of the Muzzle in White-Tailed Deer(Odocoileus virginianus)and Mule Deer(Odocoileus hemionus)Associated With Mannheimia granulomatis..Keel M Kevin;Keeler Shamus;Brown Justin;Fenton Heather;Munk Brandon;Gerhold Rick;Gottdenker Nicole;Ruder Mark;Elsmo Elizabeth;Nemeth Nicole.Veterinary pathology,2020

[5]郭珏岑.溶血性曼氏杆菌PCR检测方法比较及四川五个地区山羊曼氏杆菌感染的调查[D].西南民族大学,2023.