circRNA FISH试剂盒

背景^[1-5]

circRNA FISH试剂盒是以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法，具有安全、快速、灵敏度高、探针保存时间长、能同时显示多种颜色等优点。circRNA的亚细胞位置上也呈多样化，在细胞核、细胞质和细胞器均有分布，甚至某些circRNA具有独特的亚细胞位置，有可能是全新的亚细胞构成。

环状RNA（circular RNA）是一类存在于真核生物细胞质内的特殊的非编码RNA，具有闭合环状结构。在生物体内参与了调控miRNA及其他类型RNA、蛋白质活性及功能等。组织特异性：不同组织之间的circRNA表达量不同。时空特异性同一组织或器官的不同生长阶段，其中的circRNA表达量也会变化。circRNA的亚细胞位置上也呈多样化，在细胞核、细胞质和细胞器均有分布，甚至某些circRNA具有独特的亚细胞位置，有可能是全新的亚细胞构成。

circRNA实时定量PCR检测时高通量筛选后验证的必选实验，基于qPCR检测技术的circRNA表达与差异分析是对测序、芯片结果的有效补充和验证，是确定研究对象并进行后续功能研究或分子标志物筛选的基础。根据circRNA的闭合环形结构，针对其接头序列设计Divergent primers，能有效与线性RNA区分开来，排除线性RNA干扰。我们专业的引物设计和PCR反应体系优化，可有效保障检测数据的准确性和可靠性，可检测包括细胞、组织、血液和外泌体等多种样本中circRNA差异表达情况。

circRNA FISH试剂盒特点：

1、安全、快速、重复性好；

2、特异性100%，灵敏度超过90%；

3、探针性能稳定，低温保存一年以上；

4、荧光信号强，结果判定直观可靠；

5、操作简单，定位精准，无实验污染。

优点：

1.准确性：针对circRNA拼接位点，设计跨接头引物，即便在相应线性RNA存在的情况下也能特异性检测circRNA，使circRNA的检测准确可靠；

2.特异性：每一对特异引物都经过实验验证，熔解曲线都呈单峰，电泳条带均呈单一条带，扩增产物大小与目的基因相符；

3.专业性：每对circRNA引物均由有着多年circRNA研究经验的专业人员进行设计，并通过实验严格验证引物的特异性，保证研究结果的可靠性。

4.可定制：“circRNA引物库”已验证特异性引物达到20000多对，用户可自由定制，灵活选择，大大节约研究时间。

RIP实验是基于蛋白研究RNA-蛋白相互作用的技术，该技术是全基因组水平的检测技术，适合体内研究。

实验流程：

1.细胞裂解

2.捕获RNA-蛋白复合物

3.洗脱

4.检测

应用^[6]

circRNA FISH试剂盒可用于肿瘤的发生、发展和诊断的研究：

circRNA主要通过拮抗miRNA来发挥“海绵作用”进而调控靶基因表达,与多种疾病有着密切联系,特别是在肿瘤中发挥重要作用。例如在circRNA在妇科恶性肿瘤中的研究中circRNA可以通过多种调控方式影响基因表达,例如可负性调控miRNA表达,也可与蛋白质结合调控基因表达,或可作为相应疾病的诊断标志物或潜在治疗靶点。

参考文献

[1]Cancer incidence and mortality worldwide:Sources,methods and major patterns in GLOBOCAN 2012[J].Jacques Ferlay,Isabelle Soerjomataram,Rajesh Dikshit,Sultan Eser,Colin Mathers,Marise Rebelo,Donald Maxwell Parkin,David Forman,Freddie Bray.Int.J.Cancer.2015(5)

[2]Genome-wide Analysis of Drosophila Circular RNAs Reveals Their Structural and Sequence Properties and Age-Dependent Neural Accumulation[J].Jakub O.Westholm,Pedro Miura,Sara Olson,Sol Shenker,Brian Joseph,Piero Sanfilippo,Susan E.Celniker,Brenton R.Graveley,Eric C.Lai.Cell Reports.2014(5)

[3]The relation between endometriosis and ovarian cancer–a review[J].Lene N.Heidemann,Dorthe Hartwell,Christian H.Heidemann,Kirsten M.Jochumsen.Acta Obstet Gynecol Scand.2014(1)

[4]PABPN 1:molecular function and muscle disease[J].Ayan Banerjee,Luciano H.Apponi,Grace K.Pavlath,Anita H.Corbett.FEBS J.2013(17)

[5]MicroRNA-497 is a potential prognostic marker in human cervical cancer and functions as a tumor suppressor by targeting the insulin-like growth factor 1 receptor[J].Min Luo,Dongxiang Shen,Xiaoning Zhou,Xiaodong Chen,Wei Wang.Surgery.2013(6)

[6]康川川,赖凤娣,徐玲,钟佳宁,钟田雨,谢晓英.circRNA在妇科恶性肿瘤中的研究进展[J].赣南医学院学报,2018,38(12):1264-1268.