马节杆菌PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

马节杆菌PCR试剂盒是一种专门用于检测马节杆菌的生物试剂，采用PCR技术，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。

马节杆菌PCR试剂盒的引物经过精心优化，专一性强，只扩增巴斯德氏杆菌属，与其他微生物没有交叉反应。试剂盒通常包括PCR反应液、酶、引物等成分，以及使用手册和相关应用指南。

马节杆菌是一种革兰氏阳性的厌氧芽孢杆菌，可引起破伤风。这种试剂盒通常包含引物、酶和其他试剂，用于从样本中扩增目标DNA序列。通过PCR检测，可以快速、准确地诊断马节杆菌感染，有助于及时采取控制措施，防止病毒传播。

马节杆菌PCR试剂盒适用于对感染疾病的诊断，理论上只要样本有一个病原体存在，PCR就可以检测到。这种试剂盒在临床诊断、流行病学调查和生物安全领域具有重要的应用价值。

马节杆菌

马节杆菌PCR试剂盒具有以下特点：

特异性：引物经过精心优化，专一性强，只扩增马节杆菌，与其他病原没有交叉反应。

灵敏度高：可以达到几百拷贝/反应。

操作简便：一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。

检测速度快：由于采用荧光定量PCR技术，可以在短时间内得到检测结果。

试剂盒稳定性好：本试剂盒足够50次20L反应体系的荧光定量PCR，但只能用于科研

应用^[4-5]

马节杆菌PCR试剂盒可以用于奶牛腐蹄病病原菌的分离鉴定与生物特性研究

通过对黑龙江省部分农场采集的11份奶牛腐蹄病病料进行马节杆菌PCR试剂盒病原菌分离培养和鉴定，分别从绿色农场奶牛病蹄组织4头份、九三农场奶牛蹄部浓汁3头份病料中分离出致病性坏死梭杆菌，没有观察和分离到节瘤拟杆菌。同时从病料中分离出链球菌、大肠埃希氏杆菌、沙门氏菌、粪弯曲杆菌、化脓棒状杆菌、梭菌、酵母菌和不同的球菌等，其中化脓棒状杆菌和梭菌为腐蹄病辅助因子；链球菌、大肠埃希氏杆菌、不同的球菌等为环境常在菌。

通过对腐蹄病病料病原菌马节杆菌PCR试剂盒的分离培养筛选出适合病原菌分离用的马冻融血、厌氧血琼脂固体培养基；适合病原菌增殖的硫乙醇酸盐和坏死梭杆菌液体培养基，并找到了病原菌最适宜的培养条件干燥器培养方法。同时经生化鉴定和马节杆菌PCR试剂盒PCR检测试验证实，所采集病料中主要病原菌为坏死梭杆菌，无节瘤拟杆菌。对分离的坏死梭杆菌进行药敏试验结果表明，青霉素类、头孢菌素类、克林霉素对坏死梭杆菌抑制效果最好；红霉素、中药组方I对坏死梭杆菌中度敏感；卡那霉素、庆大霉素、万古霉素等对坏死梭杆菌耐药。

在对坏死梭杆菌进行保存条件实验，结果表明坏死梭杆菌在4℃条件下2周内存活完好；在-20℃条件下3个月内存活完好；在-70℃条件下可存活一年以上。在对坏死梭杆菌生长规律测定试验中，表明坏死梭杆菌生长在20～38h之间为对数期，34～38h之后进入稳定期。用分离的坏死梭杆菌进行实验动物致病性试验，可引起实验鼠和兔的发病与死亡，同时坏死梭杆菌在再培养过程中呈β型溶血，表明分离纯化的坏死梭杆菌有致病性。

通过对奶牛腐蹄病病原菌的分离鉴定与生物特性研究为科学地指导临床用药，治疗腐蹄病提供了科学依据，为深入开展腐蹄病病原菌的研究提供必要的实验基础。

参考文献

[1]Serogroup specific single and multiplex PCR with pre-enrichment culture and immuno-magnetic bead capture for identifying strains of D.nodosus in sheep with footrot prior to vaccination.O.P.Dhungyel;;R.J.Whittington;;J.R.Egerton.Molecular and Cellular Probes,2002

[2]Electrophoretic mobility anomalies associated with PCR amplification of the intergenic spacer region between 16S and 23S ribosomal RNA genes of Fusobacterium necrophorum.Sanjeev Kumar Narayanan;;T.G.Nagaraja;;M.M.Chengappa;;George C.Stewart.Journal of Microbiological Methods,2001

[3]Fusobacterium necrophorum infections:Virulence factors,pathogenic mechanism and control measures.Z.L.Tan;T.G.Nagaraja;M.M.Chengappa.Veterinary Research Communications,1996

[4]Prevalence,incidence,and risk factors for lameness in dairy cattle in small-scale farms in Kikuyu Division,Kenya.T.Gitau;;J.J.McDermott;;S.M.Mbiuki.Preventive Veterinary Medicine,1996

[5]孙玉国.奶牛腐蹄病病原菌的分离鉴定与生物特性研究[D].东北农业大学,2008.