腺苷-2-硫酮的合成与检测

背景

腺苷-2-硫酮又名2-硫代腺苷，2-硫代腺苷酸等，化学式为C₁₀H₁₃N₅O₄S，分子量为299.31，白色至淡黄色固体。坎格雷洛(Cangrelor)是非噻吩并吡啶类嘌呤受体P2Y12的拮抗剂，作为一种快速作用的静脉注射抗血栓药物，用于治疗急性冠脉综合征。2015年6月22日，美国食品药品监管局(FDA)批准坎格雷洛用作一种静脉抗血小板药，预防在供应心脏血流的血管冠状动脉中有害的血凝块形成。其作用机制为通过抑制腺甘酸环化酶活性，达到抑制血小板聚集作用，其适应症为经皮动脉介入治疗和动脉综合症中，防止血栓形成。我们今天所要介绍的腺苷-2-硫酮便是合成药物坎格雷洛的重要中间体。

合成方法

专利US3989682A公开了在高压条件下制备腺苷-2-硫酮的方法。另一方面，CN105893800A也公开了一种制备腺苷-2-硫酮的工艺，即将二硫化碳、二甲亚砜、四氢呋喃以及其他反应物加入反应瓶中，140-150℃搅拌12h，然后减压蒸馏除去溶剂，用乙醇、水和饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥得到产物。通过综合对比发现，现有的文献中方法更多的关注工艺可操作性，却很少关注工艺所得样品的质量。然而，现有的制备腺苷-2-硫酮的方法不可以避免会产生杂质，尤其是HPLC检测保留时间为16.7min左右杂质，现鉴定为二硫化物，有时制得的粗品会含有不低于25％的二硫化物杂质。二硫化物杂质的存在一方面降低工艺收率，另一方面增加工艺后续工艺纯化的难度。为此，需要开发一种高效去除二硫化物杂质进而高收率的获得腺苷-2-硫酮的方法。

相关研究[1]提供了一种制备腺苷-2-硫酮的方法，其步骤如下：

a)5-氨基-1-β-d-呋喃核糖基咪唑-4-甲酰胺肟或其盐任选在碱性条件下与二硫化碳反应以形成腺苷-2-硫酮粗品；

b)将腺苷-2-硫酮粗品加入含有还原剂的醇类溶液中，搅拌，过滤；

c)将步骤b)所得样品加入酸性溶液中，搅拌，过滤得目标产物，即高纯度腺苷-2-硫酮或其盐。

在一些实施方案中，步骤a)中碱性试剂选自氢氧化钠或氢氧化钾。在另一些实施方案中，步骤a)中所用溶剂可选但不限于水、甲醇、乙醇或二甲亚砜中的至少一种。

关于前文提到的二硫化物杂质，研究发现当二硫化物杂质与还原剂接触时，会发生降解进而再转化为腺苷-2-硫酮。在一些实施方案中，步骤b)中还原剂选自亚硫酸氢钠、连二亚硫酸钠、硼氢化钠、硼氢化钾或水合肼。这样一方面提高了工艺的收率，同时减轻了后期工艺纯化难度和成本。另一方面，发明人还进一步发现不同还原剂对二硫化物作用不同，但均在可以接受范围内。

检测方法

坎格雷洛中间体腺苷-2-硫酮的高效液相色谱检测方法主要包括以下步骤：

a.配制标准溶液;

b.采用反向高效液相色谱对标准溶液进行检测；

c.按外标法以峰面积计算样品中腺苷-2-硫酮的含量。

本发明检测方法可以使腺苷-2-硫酮和原料及其他杂质在高效液相色谱仪上得到良好的分离，在0.5～6.0mg/ml内，线性关系良好，R²=0.9999，平均回收率为102.11%，RSD为2.70%[2]。

参考文献

[1]王庆东,杨锦明,丁惠,等.一种制备坎格雷洛(Cangrelor)中间体腺苷-2-硫酮的方法.CN202011615483.8.

[2]杨子健,房月,邱悦,等.一种Cangrelor中间体腺苷-2-硫酮的高效液相色谱检测方法:CN201710719085.2[P].CN201710719085.2.