杀蛎包拉米虫PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

杀蛎包拉米虫PCR试剂盒是一种专门用于检测杀蛎包拉米虫的生物试剂盒。这种试剂盒通常包含引物、Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2和反应缓冲液等成分，以及可能的其他辅助试剂。

杀蛎包拉米虫PCR试剂盒具有一些重要的特性，包括高特异性、高灵敏度、稳定性和方便性。该试剂盒的引物是根据杀蛎包拉米虫的特定基因序列设计的，因此具有高特异性，可以准确地检测出杀蛎包拉米虫，而不会与其他生物发生交叉反应。此外，该试剂盒的灵敏度非常高，可以检测出极低浓度的杀蛎包拉米虫DNA或RNA。

使用杀蛎包包拉米虫PCR试剂盒进行检测时，需要按照试剂盒说明书提供的操作规程进行。通常包括提取DNA或RNA、进行PCR扩增、检测荧光信号等步骤。在操作过程中，需要注意保持实验环境的清洁和无菌，避免污染和交叉反应。

杀蛎包拉米虫PCR试剂盒

杀蛎包拉米虫PCR试剂盒具有以下特点：

1.一管式操作，用于只需要提供样品即可。

2.快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为2.0小时。

3.只需要普通PCR仪和凝胶电泳仪，无需配置贵重仪器设备。

4.对混合样品中的成分的检测下限为0.5%。

5.对样品中的成分的核酸检测下限为1.0ng/µL。

6.本产品只能用于科研，足够50次40uL体系的常规PCR。

杀蛎包拉米虫PCR试剂盒适用仪器

无DNA/RNA酶的1.5mL离心管，0.2mL PCR反应管，滤芯吸头(规格:10μL,200μL,1000μL)，离心机，振荡混合器，各种规格的移液器，琼脂糖，电泳槽，电泳仪，凝胶成像系统。

杀蛎包拉米虫PCR试剂盒样品要求

1.根据实际情况可采取食品、粪便、呕吐物、口腔样本，唾液、咽喉部鼻孔眼部和肛门拭子及病毒培养物作为检测样本。

2.应避免样本间交叉污染，样本采集后应及时检测，也可保存于-20±5℃待检，长期保存应置于-70℃以下。

杀蛎包拉米虫PCR试剂盒样品保存和运输

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

杀蛎包拉米虫PCR试剂盒结果分析判定

杀蛎包拉米虫PCR试剂盒电泳检测

取10-20μL PCR产物。电泳检测PCR产物。本产品提供的扩增液在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加loading buffer。

杀蛎包拉米虫PCR试剂盒电泳结果判断

PCR产物阳性对照必须有目的片段大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释10倍后重复PCR扩增以排除PCR抑制剂的感染。

应用^[4-5]

杀蛎包拉米虫PCR试剂盒可以用于贝类包纳米虫病焦磷酸测序检测方法的建立与应用

以焦磷酸测序技术为检测平台,在研究包纳米虫基因特性的基础上,选择包纳米虫(Bonamiaspp.)DNA序列的保守区域,利用焦磷酸测序软件设计专用引物。以OIE推荐的PCR方法构建的阳性质粒作为模板,建立了包纳米虫的PCR-焦磷酸测序检测方法,确定测得序列为包纳米虫序列,经酶切位点分析可鉴别感染种类。

以建立的包纳米虫PCR-焦磷酸测序方法对进口牡蛎(Ostrea gigas thunberg)样品进行检测,同时以杀蛎包拉米虫PCR试剂盒的PCR方法进行对照检测,检测结果表明,本研究建立的PCR-焦磷酸测序检测方法可以在基因序列水平上准确鉴定样品是否为包纳米虫感染以及感染种类,检测结果与OIE推荐方法的检测结果一致。研究结果表明,本研究建立的检测方法可应用于口岸包纳米虫感染情况的检测鉴定。

参考文献

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[2]Bonamia perspora n.sp.(Haplosporidia),a Parasite of the Oyster Ostreola equestris,is the First Bonamia Species Known to Produce Spores.RYAN B.CARNEGIE;EUGENE M.BURRESON;P.MIKE HINE;NANCY A.STOKES;CORINNEAUDEMARD;MELANIE J.BISHOP;CHARLES H.PETERSON.Journal of Eukaryotic Microbiology,2006

[3]Living with bonamiasis:Irish research since 1987.Sarah C.Culloty;;Maire F.Mulcahy.Hydrobiologia,2001

[4]Season-,age-,and sex-related variation in the prevalence of bonamiasis in flat oysters(Ostrea edulis L.)on the south coast of Ireland.Sarah C.Culloty;;Maire F.Mulcahy.Aquaculture,1996

[5]王彩霞,吴绍强,林祥梅等.贝类包纳米虫病焦磷酸测序检测方法的建立与应用[J].中国海洋大学学报(自然科学版),2017