RAP试剂盒

背景^[1-7]

RAP试剂盒用于研究RNA与DNA、RNA及蛋白质之间相互作用的实验。根据研究对象不同，RAP技术结合了高通量测序（RAP-Seq）和质谱技术（RAP-MS）分别研究与目标RNA互作的基因和蛋白质。RNA反义纯化(RNA antisense Purification，RAP)是一种检测转录后水平与RNA结合RNA和蛋白质的检测方法。

该方法是通过设计生物素或链霉亲和素探针组，把目标RNA拉下来以后，与其共同作用的RNA、蛋白质（RBPs）就会附在到磁珠上，最后根据要求分离RNA、蛋白质（RBPs），并开展qPCR、Western Blot或高通量测序、质谱进一步分析。

RAP技术是通过设计生物素或链霉亲和素探针组，把目标RNA拉下来以后，与其共同作用的DNA、RNA或蛋白质（RBPs）就会附在到磁珠上，最后把基因做高通量测序，这样会得到该调控RNA转录调控的下游靶基因。与此同时，RBPs可以开展Western Blot验证或者MS鉴定未知蛋白。

RAP试剂盒组成及试剂配制：

1、酶联板（Assay plate）

2、标准品（Standard）

3、样品稀释液（Sample Diluent）

4、生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）

5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）

6、生物素标记抗体（Biotin-antibody）

7、辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）

8、底物溶液（TMB Substrate）

9、浓洗涤液（Wash Buffer）

10、终止液（Stop Solution）

产品特点：

1.检验灵敏度高，稳定性好。

2.领先的检测方法、结果准确、重复性好。

注意事项：

1.作标准曲线时，要扣除标准品稀释液造成的本底；如果标本用标准品稀释液稀释，也要扣除标准品稀释液造成的本底，如果标本未用标准品稀释液稀释，标本不需扣除标准品稀释液造成的本底。

2.生物素(Biotin anti rat IL-10)和浓缩酶联物(HRP)用前应离心，使液体位于管底。

应用^[8]

RAP试剂盒可用于基因表达调控相关蛋白的结构和功能的研究：

基因调控蛋白YEATS domain作为一个新颖而保守的蛋白质结构域家族在从酵母到人的很多生物中发现。Taf14 YEATS domain呈现一个β三明治式的构型。酵母细胞内功能的研究证明在外界的压力环境下Taf14 YEATS domain抑制细胞的生长。

此外, Taf14的C末端与转录因子Sth1相互作用,而Sth1是RSC蛋白质复合物中必不可少的元件。Taf14N末端含有一个BRCT domain的Rap1在酵母细胞内发挥着很多作用,如控制端粒的复制以及参与糖分解和核糖体蛋白基因的激活。通过RAP试剂盒Western blot证明当结合DNA的氨基酸残基突变后,酵母细胞内的H4K20me2/3的甲基化水平发生改变。

参考文献

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[2]Degrees make all the difference:The multifunctionality of histone H4 lysine 20 methylation[J].Yu Wang,Songtao Jia.Epigenetics.2009(5)

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[4]Structural and Functional Studies of the Rap1 C-Terminus Reveal Novel Separation-of-Function Mutants[J].Elizabeth A.Feeser,Cynthia Wolberger.Journal of Molecular Biology.2008(3)

[5]Chromatin Modifications and Their Function[J].Tony Kouzarides.Cell.2007(4)

[6]Structural Basis for the Methylation State-Specific Recognition of Histone H4-K20 by 53BP1 and Crb2 in DNA Repair[J].Maria Victoria Botuyan,Joseph Lee,Irene M.Ward,Ja-Eun Kim,James R.Thompson,Junjie Chen,Georges Mer.Cell.2006(7)

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[8]张稳.基因表达调控相关蛋白的结构和功能的研究[D].中国科学技术大学,2011.