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重组TEV蛋白酶(His标签)

发布日期:2020/1/20 8:50:27

背景及概述[1]

蛋白酶是催化蛋白质水解的一类酶,是酶学研究中较早也是最深入的一种酶。到本世纪初,已经报导的微生物蛋白酶估计超过900种, 生物体的生理活动和疾病的发生,如食物之消化吸收、血液之凝固、溶血作用、炎症、血压调节、细胞分化自溶,机体衰老、癌症转移、生理活性肽的活化等,莫不与蛋白酶有关。重组TEV蛋白酶(His标签)是烟草花叶病毒小核体蛋白a催化结构域基因编码的经高度纯化的制剂,该酶的生物学功能是在病毒产生过程中将多蛋白体酶解为单一蛋白。和因子Xa、凝血酶相比,TEV酶是识别序列更加严格。做为生物工程下游技术中融合蛋白酶切使用的重要工具酶,TEV酶识别非常一致的7氨基酸序列:E-Xaa-Xaa-Y -Xaa-Q-P1’(G/S),酶切发生在Q和P1’之间的肽键。最常用的7氨基酸序列是ENLYFQG。P1’位置可以是不同的小分子氨基酸,这样目标蛋白从融合蛋白的N端释放,带自然的N末端或者只多一个氨基酸的蛋白。该产品是经过了基因工程改造的蛋白酶,稳定性好,在广泛的温度范围具有特异性。本品来源于重组大肠杆菌,经过高度纯化,比活性达到10,000U/mg。最适酶切温度是30℃,但在4℃也具有酶活性。rTEV-H带His标签,酶切后可方便地通过Ni亲和柱层析去除。酶切的条件比如:温度、pH、DTT等可根据具体蛋白进行优化。

纯度

经SDS-PAGE电泳分析,大于95%。

活性单位

一个酶活性单位定义为在4℃,pH8.0条件下,12~16小时在酶切反应缓冲液中将5μg融合蛋白95%酶切所需要的酶量。

推荐酶切条件

融合蛋白                                  0.1mg

重组TEV蛋白酶                           20U

10x酶切缓冲液                            10μl

温度(℃)                                      4

总体积                                       100μl

时间(小时)                           12~16

10x 酶切缓冲液

500 mM Tris-HCl, pH 8.0

5 mM EDTA

1% Tween-20 (v/v)

10 mM DTT

保存条件

-20℃保存活性保持2年以上。

主要参考资料

[1] 胡学智, & 王俊. (2008). 蛋白酶生产和应用的进展 (Doctoral dissertation).

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