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固定化INDUMY核酸酶的应用及制备

发布日期:2020/1/17 8:12:58

背景及概述[1]

核酸酶是一类能够水解DNA与RNA等核酸分子的酶。根据底物偏好差异,核酸酶分为RNA核酸酶与DNA核酸酶。核酸酶在食品工业中具有广泛应用,用于生产单核苷酸产品,以及去除蛋白,糖等生物制品中的核酸杂质。INDUMY核酸酶是高度纯化的大肠杆菌表达重组核酸酶。

应用[1]

核酸酶具有广阔的应用前景,适合从生物制品中去除核酸,其主要应用于以下几个方面:

1、提高产品质量:核酸酶通过降低生物制品,尤其是病毒类产品外源性核酸的含量,减少过敏反应,提高制品安全性;

2、改善重组蛋白工艺:工程细胞裂解后加入核酸酶可降低料液的黏度,缩短处理时间,提高蛋白产量,离心时有利于沉淀和上清液的分离,超滤时有利于各成分的分离,提高柱层析纯化时的有效性;

3、颗粒(病毒、包涵体等)预处理:有助于颗粒的纯化;

4、生物分析样品的处理:在ELISA、柱层析、二维电泳和印迹分析中,通过核酸酶的作用可提高分辨率和回收率。

固定化INDUMY核酸酶与游离酶相比,具有不可比拟的优点,主要表现在:首先,酶与产物易于分开,因而可以回收再利用;其次,在一定程度上可以改善酶的操作性能和稳定性;第三,可以多次反复使用和连续操作,降低生产成本;第四,酶不混入产物,可以精简分离工序等。酶经过固定化后对酶的催化性能产生影响,其本身的结构必将受到扰动,同时其参与的催化反应也由均相体系变为固一液两相体系。

制备[1]

一种固定化INDUMY核酸酶,由核酸酶和固相载体组成,固定化核酸酶由核酸酶通过共价键与固相载体上的基团相连接而成。本核酸酶是具有水解各种核酸分子,如DNA、RNA、染色体DNA、病毒核酸的多功能核酸酶,特别是粘质沙雷氏菌非特异性核酸内切酶,尤其是适合于大量制备的重组粘质沙雷氏菌非特异性核酸内切酶。本固定化核酸酶,采用的固相载体包括有机高分子,如纤维素、琼脂糖、离子交换树脂;天然高分子,如海藻酸、角叉菜胶、胶原、几丁质、壳聚糖;合成高分子,如聚丙烯酰胺、聚酰胺、聚氨酯;无机载体。

优选的是交联琼脂糖凝胶,如琼脂糖Sepharose4B,琼脂糖SepharoseCL-6B。本固定化核酸酶的粒径为10~200μm,核酸酶与载体的结合比例为0.1~20mg/1g凝胶,优选的5~15mg/1g凝胶,特别优选的8~12mg/1g凝胶。本固定化核酸酶的活性大于500U/g,作用的pH范围为6~8,最适作用温度为37℃。本方法,首先取带有活泼基团的载体,用活化剂活化载体,将核酸酶氨基与活化载体相连接得到固定化核酸酶。核酸酶与载体结合反应的比例为5~50mg/1g载体,优选的是10~20mg/1g载体,特别优选的是10~15mg/1g载体。载体的活化采用溴化氰、环氧氯丙烷。核酸酶与载体结合的温度为4℃~30℃,优选的是4℃~25℃,特别优选的是4℃~8℃。核酸酶与载体结合的时间为12~36小时,优选的为16~24小时。

主要参考资料

[1] CN201310231034.7 一种固定化核酸酶及其制备方法

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