黏蛋白异染染色液(天青A法)的应用

背景^[1-3]

黏蛋白异染染色液(天青A法)是一种用于检测组织中黏蛋白的染色液。它通常使用天青A作为染料，可以与黏蛋白结合并使其呈现蓝色。

黏蛋白是一类大分子蛋白质，在许多组织和器官中都有分布，包括皮肤、肺、肠道、乳腺等。它们对于细胞外基质的构建和维护以及细胞间的粘附和信号传递都起着重要作用。

黏蛋白异染染色液可以通过染色来检测组织中的黏蛋白含量和分布情况。通过显微镜观察染色后的样品，可以确定不同组织或细胞中黏蛋白的分布和数量，从而为疾病的诊断和治疗提供有用的信息。

黏蛋白异染染色液(天青A法)

黏液物质染色有多种方法，如AB-PAS染色、黏液HID-AB染色、标准阿利新蓝染色等。以上方法大多是利用阿利新蓝(Alcian)属于阳离子染料可与酸性基团结合，也即阿尔辛蓝与组织内含有的阴离子基团如羧基和硫酸根形成不溶性复合物这一原理。

黏蛋白染色液(天青A异染法)是利用天青的异染性这一特性，染色后组织或组织成分着染的颜色与染料复合物的原有颜色明显不同而且可形成鲜明的对比。染色后，切片处理对异染染色的稳定性非常重要，宜采用乙醇保存。

黏蛋白异染染色液(天青A法)操作步骤：

1.切片脱蜡至水。

2.黏蛋白染色液(天青A异染法)染色10min，去离子水冲洗5min。

3.梯度乙醇脱水，二甲苯透明，混合封片剂封片。

染色结果：

酸性黏蛋白和蛋白多糖：红色至紫色；

背景：蓝色。

应用^[4][5]

黏蛋白异染染色液(天青A法)可以用于人前梯度蛋白2与黏蛋白5AC在慢性鼻-鼻窦炎中的表达及意义

通过对比慢性鼻-鼻窦炎伴或不伴鼻息肉患者与正常对照组中人前梯度蛋白2(AGR2)与黏蛋白5AC(MUC5AC)的病理染色情况及相关蛋白和mRNA表达水平的差异,初步讨论AGR2在慢性鼻-鼻窦炎(CRS)发生机制中的作用;另一方面,通过对AGR2和MUC5AC表达水平的相关性分析,探讨CRS中黏蛋白产生的分子机制,为AGR2可能参与CRS黏液高分泌的调控提供佐证,为黏液高分泌相关疾病的靶向治疗提供新的参考。

方法:收集15例伴有鼻息肉的CRS患者的息肉组织,15例不伴鼻息肉的CRS患者下鼻甲黏膜和15例鼻中隔偏曲或鼻外伤病人的下鼻甲黏膜组织,通过苏木精-伊红染色(HE染色)观察各组鼻黏膜组织形态学改变,采用爱先蓝-糖原染色(AB-PAS染色)和黏蛋白异染染色液(天青A法)观察鼻黏膜上皮杯状细胞改变和黏蛋白(MUC)的表达情况,用免疫组织化学染色(IHC)与定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测AGR2和MUC5AC在鼻黏膜组织中的表达。

结果:1、HE染色结果显示,CRSsNP组和CRSwNP组患者与对照组相比,鼻黏膜上皮增厚,可见杯状细胞增生明显以及鼻黏膜组织中炎症细胞浸润。

2、AB-PAS染色显示,在所有分析病例中,可见酸性黏蛋白MUC广泛表达于上皮的杯状细胞中,染色呈现较强的蓝色。对照组MCU的光密度值为3.98%±1.74%;CRSsNP组MUC的光密度值为14.69%±2.85%;CRSwNP组MUC的光密度值为17.01%±3.62%,与对照组相比,CRSsNP和CRSwNP组上皮MUC均高表达(呈显著蓝色)(均P<0.05),而两组之间阳性表达率无统计学差异(P>0.05)。

3、黏蛋白5AC染色显示,MUC5AC在CRSsNP组和CRSwNP组黏膜上皮呈大面积的棕黄色染色,主要位于杯状细胞的胞浆内,而对照组可见上皮有零散分布的浅黄色着色。对照组MUC5AC的光密度值为2.78%±1.36%;CRSsNP组MUC5AC的光密度值为16.18%±5.88%;CRSwNP组MUC5AC的光密度值为19.60%±4.26%,CRS两组分别与对照组相比结果均有统计学差异(均P<0.05);但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。

4、AGR2染色显示,AGR2在CRSsNP或CRSwNP黏膜上皮胞质中呈大量棕褐色着色,对照组上皮可见零散分布的棕黄色着色。CRSsNP组AGR2的光密度值为20.26%±2.97%;CRSwNP组AGR2的光密度值为23.87%±6.38%,对照组AGR2的光密度值为3.76%±1.95%;CRS两组分别与对照组相比均有统计学差异(均P<0.05),但两组之间结果无统计学差异(P>0.05)。

5、qRT-PCR检测结果表明,所有病例均检测到AGR2和MUC5AC的mRNA表达。CRSsNP组和CRSwNP组AGR2和MUC5A的mRNA表达水平较正常对照组均显著升高,且差异均有统计学意义(均P<0.05)。CRSsNP和CRSwNP两组之间AGR2和MUC5AC的mRNA水平均无明显差异(均P>0.05)。

6、将慢性鼻-鼻窦炎伴或不伴鼻息肉的两组中AGR2和MUC5AC的mRNA表达量,用Spearman相关性检验进行分析,结果显示无论在CRSsNP组还是CRSwNP组中,AGR2 mRNA表达量与MUC5AC mRNA表达量均存在一种近似线性的关系(即正相关性)(r=0.68,r=0.76,均P<0.05);这种关系结果提示AGR2基因表达上调可能对MUC5AC的产生起促进作用。

结论:AGR2和MUC5AC在CRS患者鼻黏膜中高表达,且两者存在线性相关,提示AGR2可能被认为是调节CRS患者黏液高分泌的治疗靶点。

参考文献

[1]Procedures to Evaluate Inflammatory and Pathological Changes During Allergic Airway Inflammation..Rao Savita P;RastleSimpson Stephanie;Dileepan Mythili;Sriramarao P.Methods in molecular biology(Clifton,N.J.),2021

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[5]王娜.人前梯度蛋白2与黏蛋白5AC在慢性鼻-鼻窦炎中的表达及意义[D].山西医科大学,2022.